[發明專利]從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法

有效

• 申請號: 201310073453.2
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103172724A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 馬美湖;耿放;黃茜
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K14/465
• 分類號: C07K14/465;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 樊戎;徐紹新

技術領域

本發明涉及卵巨球蛋白的提取方法，具體為一種從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法。

背景技術

雞蛋清來源廣泛，價格低廉，干物質中蛋白質含量超過80%，是最理想的蛋白質資源之一。卵巨球蛋白是雞蛋清中一種具有重要生物活性的蛋白質，其含量僅為蛋清蛋白質的0.5%，因其具有抑制蛋白酶的生物活性，表現出抗炎、促進傷口愈合、抑制敗血癥等功能活性，在醫學等領域應用前景廣闊。

但是由于卵巨球蛋白在雞蛋清中含量低，且不恰當的制備方法將使其喪失活性，因此如何純化獲得純蛋白成為其研究的難題之一。目前，卵巨球蛋白的分離純化均通過多步層析的方法獲得，步驟繁多、耗時漫長，且多種填料的使用大大增加了生產成本。此外，在分離過程中，每一步驟的操作都將不可避免地導致目標蛋白不同程度的損失，由于操作步驟繁多，導致產品得率很低，僅為20%左右。因此，開發出一種操作簡單、純化周期短、得率高的卵巨球蛋白分離純化方法，將具有重要的應用價值。

發明內容

本發明的目的是為了克服上述缺陷，提供一種簡單、快速和高效的從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法。

上述目的是通過以下技術方案實現的：

一種從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，該方法包括以下步驟：

（1）雞蛋清溶液的制備

采用新鮮雞蛋，將蛋清和蛋黃分開，收集雞蛋清，邊攪拌邊向雞蛋清中緩緩加入0.6～3倍體積的蒸餾水，加入完成后，繼續攪拌2～3h，得雞蛋清溶液；

（2）聚乙二醇分離

準確稱取上述雞蛋清溶液，按質量加入3～5%的聚乙二醇8000，攪拌2～3h，然后在8000～12000轉/分的轉速下離心8～15min，收集上清液，再向上清液中加入聚乙二醇8000，使聚乙二醇8000在上清液中的質量濃度達到8～10%，攪拌2～3h，然后在8000～12000轉/分的轉速下離心8～15min，收集沉淀；

（3）沉淀溶解與處理

將所得沉淀置于含有0.3～0.5M氯化鈉的PBS緩沖液中，PBS緩沖液的體積是步驟（1）中的雞蛋清體積的1/8～1/5，攪拌使沉淀溶解，再離心除去少量不溶物，取上清液待下一步純化；

（4）凝膠過濾層析純化

使用Sephacryl?S-200HR作為凝膠過濾層析填料，裝填后用PBS緩沖液對層析柱進行平衡，將第3步獲得的上清液注入到層析柱中，用PBS緩沖液進行洗脫，收集第一個層析峰，即得卵巨球蛋白。

優選地，步驟（1）中所述蒸餾水的加入量是雞蛋清體積的1倍。

優選地，步驟（2）中第一次加入的聚乙二醇8000是雞蛋清溶液質量的3.2～4.4%，第二次加入的聚乙二醇8000在上清液中的質量濃度為8.4～9.2%。

進一步優選地，步驟（2）中第一次加入的聚乙二醇8000是雞蛋清溶液質量的4%，第二次加入的聚乙二醇8000在上清液中的質量濃度為8.8%。

優選地，步驟（4）中的洗脫流速為0.5～0.8mL/min。

進一步優選地，步驟（4）中的洗脫流速為0.65～0.75mL/min。

本發明的有益效果在于：

（1）根據雞蛋清蛋白質的特點設計卵巨球蛋白的提取方案：首先根據卵黏蛋白溶解度差的特點，采用聚乙二醇沉淀法將其除去，再利用卵巨球蛋白與其它蛋清蛋白質分子量上的巨大差異采用凝膠過濾層析將其純化。過程中僅使用了一步層析，大大簡化了操作，同時也降低了購買層析填料的成本。

（2）整個方法過程僅需10～12小時即可完成，與現有方法2～3天的周期相比，大大縮短了時間，提高了效率，降低了人工和時間成本。

（3）所得卵巨球蛋白樣品純度達到95.98%，在保持高純度的同時，回收率也大幅提高，回收率從現有方法的約20%提高至61.4%，充分利用了蛋清蛋白質資源。

附圖說明

圖1為卵巨球蛋白分離純化流程圖；

圖2為凝膠過濾層析圖譜；

圖3為卵巨球蛋白SDS-PAGE電泳圖；

圖4為卵巨球蛋白高相液相色譜圖。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明進行詳細地說明。

實施例1

一種從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，該方法包括以下步驟：

（1）雞蛋清溶液的制備

取當天產出的新鮮雞蛋，人工打蛋，使用分離器將蛋清和蛋黃分開，收集雞蛋清，邊磁力攪拌邊向雞蛋清中緩緩加入等體積的純水，加入完成后，繼續磁力攪拌3h，得雞蛋清溶液。