[發明專利]從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法

有效

• 申請號: 201310073453.2
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103172724A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 馬美湖;耿放;黃茜
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K14/465
• 分類號: C07K14/465;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 樊戎;徐紹新

1.一種從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

（1）雞蛋清溶液的制備

取新鮮雞蛋，將蛋清和蛋黃分開，收集雞蛋清，邊攪拌邊向雞蛋清中緩緩加入0.6~3倍體積的蒸餾水，加入完成后，繼續攪拌2~3h，得雞蛋清溶液；

（2）聚乙二醇分離

稱取上述雞蛋清溶液，按質量加入3~5%的聚乙二醇8000，攪拌2~3h，然后在8000~12000轉/分的轉速下離心8~15min，收集上清液，再向上清液中加入聚乙二醇8000，使聚乙二醇8000在上清液中的質量濃度達到8~10%，攪拌2~3h，然后在8000~12000轉/分的轉速下離心8~15min，收集沉淀；

（3）沉淀溶解與處理

將所得沉淀置于含有0.3~0.5M氯化鈉的PBS緩沖液中，PBS緩沖液的體積是步驟（1）中的雞蛋清體積的1/8~1/5，攪拌使沉淀溶解，再離心除去少量不溶物，取上清液待下一步純化；

（4）凝膠過濾層析純化

使用Sephacryl?S-200?HR作為凝膠過濾層析填料，裝填后用PBS緩沖液對層析柱進行平衡，將步驟（3）中獲得的上清液注入到層析柱中，用PBS緩沖液進行洗脫，收集第一個層析峰，即得卵巨球蛋白。

2.如權利要求1所述的從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，其特征在于：步驟（1）中所述蒸餾水的加入量是雞蛋清體積的1倍。

3.如權利要求1或2所述的從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，其特征在于：步驟（2）中第一次加入的聚乙二醇8000是雞蛋清溶液質量的3.2~4.4%，第二次加入的聚乙二醇8000在上清液中的質量濃度為8.4~9.2%。

4.如權利要求3所述的從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，其特征在于：步驟（2）中第一次加入的聚乙二醇8000是雞蛋清溶液質量的4%，第二次加入的聚乙二醇8000在上清液中的質量濃度為8.8%。

5.如權利要求1所述的從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，其特征在于：步驟（4）中的洗脫流速為0.5~0.8mL/min。

6.如權利要求5所述的從雞蛋清中提取卵巨球蛋白的方法，其特征在于：步驟（4）中的洗脫流速為0.65~0.75mL/min。