[發明專利]結核分枝桿菌候選抗原多肽及其應用

有效

• 申請號: 201310072318.6
• 申請日: 2013-03-07
• 公開（公告）號: CN103304646A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 于楊;劉海鷹;張艷;金奇
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院病原生物學研究所
• 主分類號: C07K14/35
• 分類號: C07K14/35;C07K19/00;A61K39/04;A61P31/06
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種結核分枝桿菌候選抗原多肽及其應用。背景技術

據WHO統計，世界上近1/3的人口感染有結核分枝桿菌（Mtb），且隨著耐藥肺結核病和肺結核病與艾滋病混合感染的增多，肺結核病已經嚴重危害人民健康，據統計近幾年在我國傳染病發病數和死亡數中肺結核的排名一直位居前兩位。肺結核病已是一種嚴重危害人民健康和國民經濟的傳染病，而中國是肺結核病的高負擔國，那么對于肺結核病防控策略的制定就成為了關系我國國計民生的重大問題。對于肺結核病的防治目前應用最多的當屬“化療”，化學藥物的治療對肺結核病有明顯的效果，但隨著“耐多藥結核”（MDR-TB）和“嚴重耐藥結核”(XDR-TB)發病率的升高，化療顯現出了局限性。那么，新的防治方法就成為了亟待解決的問題。一直以來，利用免疫學方法尋找新的有效預防和治療肺結核病的手段都是該領域研究的熱點與重點。運用疫苗預防和治療肺結核病是最有效的肺結核病防控策略之一，但是現階段研究進展緩慢。目前，唯一可用于預防肺結核病的疫苗――卡介苗（BCG）僅對兒童播散性結核有一定的保護效果，但一般認為對成人結核保護效果比較弱。雖然一些新型的抗肺結核病疫苗相繼被開發，但大多仍處于探索階段，效果不甚理想。其中重要原因除了肺結核病免疫保護機理不十分清楚，還有就是在不同感染時期引起免疫反應的結核分枝桿菌有效抗原仍然不明確，這就成為了疫苗設計以及免疫策略制定的障礙。抗原關系到疫苗的成敗，那么篩選出與發病密切相關的功能性抗原以及更好地了解其免疫應答機制就可以為研制不同臨床需求的疫苗、制定免疫策略提供更多實際應用選擇。

在腫瘤研究領域有研究標明，腫瘤細胞表達的分子伴侶蛋白（Hsp70、Gp96等），利用含有Hsp70、Gp96等蛋白的疫苗免疫小鼠后可引起針對腫瘤抗原的特異性免疫反應，推測分子伴侶攜帶有腫瘤特異性抗原肽；在感染性疾病研究領域，有研究從乙肝病灶組織中提取的Gp96蛋白帶有一段HBV（乙肝病毒）特異性抗原。對于肺結核免疫研究領域，目前還沒有直接從肺組織內篩選結核桿菌抗原的相關報道。

目前對于分子伴侶蛋白的分離方法有親和層析，還有一種方法通過Rotofor液相等電聚焦電泳技術得到富集多種分子伴侶的蛋白混合物。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種多肽。

本發明提供的多肽，是如下1）或2）：

1）由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的多肽；

2）分別將1）所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能分別由1）-4）衍生的多肽。

所述一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加為不超過10個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。

本發明的另一個目的是提供一種組合物。

本發明提供的組合物，由多肽1、多肽2和多肽3的三種或者任意兩種組成；

所述多肽1的氨基酸序列為序列表中序列1自N末端19-27位；

所述多肽2的氨基酸序列為序列表中序列1自N末端21-29位；

所述多肽3的氨基酸序列為序列表中序列1自N末端9-17位。

上述組合物由所述多肽1、所述多肽2和所述多肽3組成。

上述組合物中，所述多肽1、所述多肽2和所述多肽3的質量比為（0.5-1.5）：（0.5-1.5）：1；所述多肽1、所述多肽2和所述多肽3的質量比具體為1：1：1。

所述組合物的功能為如下1）-5）中的至少一種：

1）用于制備肺結核疫苗；

2）用于制備激活或促進肺結核患者體內特異性CTL反應產品；

3）用于制備激活或促進結核分枝桿菌抗原特異性CTL反應產品；

4）用于制備激活或促進肺結核患者體內特異性IFN-γ產生的產品；

5）用于制備促進或激活結核分枝桿菌抗原特異性IFN-γ產生的產品。

上述功能中，肺結核患者體內特異性CTL反應為如下兩種：

A為針對所述多肽的特異性CTL反應；

B為針對結核分枝桿菌其他抗原的特異性CTL反應，所述其他抗原包括結核分枝桿菌中除所述多肽以外的其他多肽抗原和結核分枝桿菌中的其他大分子抗原。

所述促進肺結核患者體內特異性CTL反應或促進結核分枝桿菌抗原特異性CTL反應體現如下a和/或b：

a）提高裂解酶的表達量，

所述裂解酶為granzyme?A和/或perforin；