[發(fā)明專利]應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310072023.9
• 申請日: 2013-03-07
• 公開（公告）號: CN103146660A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張?zhí)m威;張莉麗;易華西;單毓娟;馮鎮(zhèn);杜明;韓雪;張英春;李洪波;焦月華
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12R1/465
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法，采用茂原鏈霉菌為發(fā)酵菌株，經(jīng)斜面培養(yǎng)和種子培養(yǎng)后，接種在發(fā)酵培養(yǎng)基中經(jīng)液體發(fā)酵制備谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶，其特征在于在發(fā)酵過程中分別通過熱處理培養(yǎng)基、在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加醇類或NaCl，發(fā)酵96h提高鏈霉菌谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶的產(chǎn)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法，其特征在于所述熱處理培養(yǎng)基的方法為將發(fā)酵48h的培養(yǎng)物加熱到60-65℃，處理0.5-1.5min，繼續(xù)發(fā)酵至96h。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法，其特征在于在發(fā)酵起始時加入培養(yǎng)基重量比的1-3%甲醇或在發(fā)酵起始時添加0.15-0.25?mol/L?NaCl，發(fā)酵至96h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法，其特征在于所述方法具體步驟如下：用5?mL無菌生理鹽水將培養(yǎng)7?d的斜面孢子洗下，接種于100?mL種子培養(yǎng)基中，30?℃，200?r/min培養(yǎng)48?h后，按10%的接種量添加到發(fā)酵培養(yǎng)基中，30℃、200r/min采用提高谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的培養(yǎng)方式培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的發(fā)酵液經(jīng)板框過濾器過濾或壓濾，再經(jīng)0.22μm濾膜的微過濾裝置過濾，制成無細(xì)胞的酶液，添加載體保護(hù)劑充分混溶，采用低溫噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法，其特征在于所述保護(hù)劑為以無細(xì)胞的酶液計蔗糖1-2%，海藻糖3-5%，甘油3-6%。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法，其特征在于所述保護(hù)劑經(jīng)100℃、1小時烘干，在無菌條件下與無細(xì)胞的酶液充分混溶。

7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法，其特征在于所述保護(hù)劑與無細(xì)胞酶液充分混溶，再經(jīng)0.22μm濾膜的微過濾裝置過濾除菌。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法，其特征在于所述低溫噴霧干燥的條件為進(jìn)風(fēng)溫度80℃，出風(fēng)溫度55-?60℃。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)激條件提高茂原鏈霉菌生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶產(chǎn)量的方法，其特征在于所述冷凍干燥采用真空冷凍干燥機干燥，凍干機冷井溫度為-60℃，真空度為0.05MPa。