[發明專利]應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法

無效

• 申請號: 201310072023.9
• 申請日: 2013-03-07
• 公開（公告）號: CN103146660A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 張蘭威;張莉麗;易華西;單毓娟;馮鎮;杜明;韓雪;張英春;李洪波;焦月華
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12R1/465
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法，采用茂原鏈霉菌為發酵菌株，經斜面培養和種子培養后，接種在發酵培養基中經液體發酵制備谷氨酰胺轉氨酶，其特征在于在發酵過程中分別通過熱處理培養基、在發酵培養基中添加醇類或NaCl，發酵96h提高鏈霉菌谷氨酰胺轉氨酶的產量。

2.根據權利要求1所述的應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法，其特征在于所述熱處理培養基的方法為將發酵48h的培養物加熱到60-65℃，處理0.5-1.5min，繼續發酵至96h。

3.根據權利要求1所述的應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法，其特征在于在發酵起始時加入培養基重量比的1-3%甲醇或在發酵起始時添加0.15-0.25?mol/L?NaCl，發酵至96h。

4.根據權利要求1、2或3所述的應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法，其特征在于所述方法具體步驟如下：用5?mL無菌生理鹽水將培養7?d的斜面孢子洗下，接種于100?mL種子培養基中，30?℃，200?r/min培養48?h后，按10%的接種量添加到發酵培養基中，30℃、200r/min采用提高谷氨酰胺轉氨酶產量的培養方式培養，將培養好的發酵液經板框過濾器過濾或壓濾，再經0.22μm濾膜的微過濾裝置過濾，制成無細胞的酶液，添加載體保護劑充分混溶，采用低溫噴霧干燥或冷凍干燥制成干粉。

5.根據權利要求4所述的應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法，其特征在于所述保護劑為以無細胞的酶液計蔗糖1-2%，海藻糖3-5%，甘油3-6%。

6.根據權利要求4或5所述的應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法，其特征在于所述保護劑經100℃、1小時烘干，在無菌條件下與無細胞的酶液充分混溶。

7.根據權利要求4或5所述的應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法，其特征在于所述保護劑與無細胞酶液充分混溶，再經0.22μm濾膜的微過濾裝置過濾除菌。

8.根據權利要求4所述的應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法，其特征在于所述低溫噴霧干燥的條件為進風溫度80℃，出風溫度55-?60℃。

9.根據權利要求4所述的應激條件提高茂原鏈霉菌生產谷氨酰胺轉氨酶產量的方法，其特征在于所述冷凍干燥采用真空冷凍干燥機干燥，凍干機冷井溫度為-60℃，真空度為0.05MPa。