[發(fā)明專利]HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定苦碟子注射液中五種有機(jī)酸類成分含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310071078.8
• 申請(qǐng)日: 2013-03-07
• 公開（公告）號(hào): CN103163243A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉睿;孫璐;趙雯;李遇伯;張艷軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 通化旺維專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 22205
• 代理人: 王偉

技術(shù)領(lǐng)域　

本發(fā)明涉及一種HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定苦碟子注射液中五種有機(jī)酸類成分含量的方法，屬于中藥成分分析領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

在現(xiàn)有技術(shù)中，苦碟子別名滿天星，苦荬菜，主要分布于我國東北及內(nèi)蒙古等地，為菊科植物抱莖苦荬菜(Ixeris?sonchifolia(Bge.)Hance)的當(dāng)年生干燥全草，性寒，味苦、辛，具有清熱解毒、排膿止痛之功效^[1]。苦碟子(碟脈靈)注射液是以苦碟子為原料提取精制而成的靜脈注射液,?具有活血化瘀，改善微循環(huán)的作用^[2]。該注射液已上市多年，療效確切。實(shí)驗(yàn)研究表明，苦碟子注射液化學(xué)成分比較復(fù)雜，而與其臨床療效相關(guān)的主要活性成分為有機(jī)酸類、黃酮類和核苷類成分。

苦碟子注射液（曾用名：碟脈靈注射液）列入國家藥品標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品（國藥準(zhǔn)字Z20025450），由通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

處方：抱莖苦荬菜1000g，制成1000ml。

制法：取抱莖苦荬菜，加水煎煮二次，第一次1小時(shí)，第二次0.5小時(shí)，合并煎液，濃縮至每1ml相當(dāng)于原生藥0.5g，放冷至40℃以下，在攪拌下加10%氧化鈣乳調(diào)節(jié)pH值至10，放置12小時(shí)，離心，離心沉淀物稱重，懸浮于5.3倍量95%乙醇中（使含醇量達(dá)80%），加50%硫酸溶液調(diào)節(jié)pH值至3－4，充分?jǐn)嚢枋狗磻?yīng)完全，離心，離心液加40%氫氧化鈉溶液中和pH值至7.0，濾過，濾液回收乙醇，并揮盡乙醇，用注射用水稀釋至每1ml相當(dāng)于原生藥4g，置-5℃以下放置12小時(shí)以上，濾過，濾液加0.1－0.2%藥用活性炭粉末，煮沸15分鐘，置-5℃以下放置24小時(shí)以上，濾過，濾液加注射用水稀釋至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至7.0－7.5，濾過，灌封，滅菌?，即得。性狀：本品為淺黃棕色至黃棕色的澄明液體。

含量測(cè)定：含量測(cè)定：本品每10ml含總黃酮以無水蘆丁（C₂₇H₃₀O₁₆）計(jì)，不得少于4.0mg。含抱莖苦荬菜以腺苷（C₁₀H₁₂N₅O₄）計(jì)，不得少于0.025mg。

功能主治：活血止痛，清熱祛瘀。用于瘀血閉阻的胸痹，證見：胸悶、心痛，口苦，舌暗紅或存瘀斑等。適用于冠心病、心絞痛見上述病狀者。亦可用于腦梗塞者。

用法用量：靜脈滴注，一次10－40ml，一日1次；用5%葡萄糖或0.9%氯化鈉注射液稀釋至250－500ml后應(yīng)用；14天為一療程；或遵醫(yī)囑。

規(guī)格：每支裝（1）10ml，（2）20ml，（3）40ml。

實(shí)驗(yàn)研究表明，苦碟子注射液化學(xué)成分比較復(fù)雜，而與其臨床療效相關(guān)的主要活性成分為有機(jī)酸、黃酮類和核苷類成分。

有機(jī)酸類成分能夠降低血清中肌酸磷酸激酶(CPK)?及乳酸脫氫酶(LDH)?的活性，對(duì)大鼠急性心肌缺血有明顯的保護(hù)作用。此外，對(duì)冠心病有顯著的治療作用，且臨床應(yīng)用無明顯副作用。植物中的有機(jī)酸類物質(zhì)能夠抑制血小板的聚集粘連，誘導(dǎo)血管舒張，并抑制脂新陳代謝中的酶作用，有助于防止冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化和中風(fēng)等常見心腦血管疾病的發(fā)生。

目前，有機(jī)酸類化合物含量測(cè)定方法主要有紫外分光光度法、電位滴定法等。紫外法特異性較差，電位滴定法對(duì)儀器要求較高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)上述不足而提供一種用HPLC-DAD技術(shù)建立同時(shí)測(cè)定五種有機(jī)酸類化合物(單咖啡酰基酒石酸、咖啡酸、綠原酸、阿魏酸、菊苣酸)的分析方法，并應(yīng)用該方法測(cè)定苦碟子注射液中主要有機(jī)酸類化合物的含量，以期為注射液的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)，同時(shí)為其質(zhì)量控制提供方法學(xué)參考依據(jù)。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：一種HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定苦碟子注射液中五種有機(jī)酸類成分含量的方法，其步驟如下：

（1）混合對(duì)照品溶液的配制：?