[發明專利]HPLC-DAD法同時測定苦碟子注射液中五種有機酸類成分含量的方法

有效

• 申請號: 201310071078.8
• 申請日: 2013-03-07
• 公開（公告）號: CN103163243A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 劉睿;孫璐;趙雯;李遇伯;張艷軍
• 申請（專利權）人: 通化華夏藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 通化旺維專利商標事務所有限公司 22205
• 代理人: 王偉

1.?一種HPLC-DAD法同時測定苦碟子注射液中五種有機酸類成分含量的方法，其特征在于步驟如下：

（1）混合對照品溶液的配制：?

分別精密稱取單咖啡酰基酒石酸標準品2.04?mg、咖啡酸標準品1.13?mg、綠原酸標準品1.11?mg、阿魏酸標準品1.28?mg、菊苣酸標準品2.22?mg、置于10?mL容量瓶中，用50%甲醇溶解，定容至刻度，搖勻，即得混合對照品儲備液；分別精密吸取上述混合對照品儲備液適量，制成含單咖啡酰基酒石酸81.60μg·mL^-1、綠原酸11.10μg·mL^-1、咖啡酸11.30μg·mL^-1、阿魏酸12.80μg·mL^-1、菊苣酸55.50μg·mL^-1的混合對照品溶液；

（2）供試品溶液的配制：

取苦碟子注射液，用50%甲醇稀釋，經過0.45μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.（3）測定法:?采用HPLC-DAD法分別精密吸取混合對照品溶液和供試品溶液，注入檢測器，測定，即得；

色譜條件：色譜柱：Diamonsil?C_18?(2)?；柱溫：40℃；檢測波長：?325?nm；流速：1?mL·min^-1；進樣量：10?μL；流動相：乙腈，0.1％甲酸水；梯度洗脫條件：0-15?min，9%乙腈線性增加至11%，15-16?min線性增加至18%乙腈，16-30?min線性增加至20%乙腈，30-40?min線性增加至49%乙腈。

3.按照權利要求1所述的HPLC-DAD法同時測定苦碟子注射液中五種有機酸類成分含量的方法，其特征在于步驟（3）測定法中包括線性關系測定；即分別精密吸取混合對照品儲備液1mL，加入50%的甲醇1mL，搖勻，制得混合對照品標準溶液，其中含有單咖啡酰基酒石酸40.80μg·mL^-1、綠原酸5.550μg·mL^-1、咖啡酸5.650μg·mL^-1、阿魏酸6.400μg·mL^-1、菊苣酸27.75μg·mL^-1，再取該稀釋液，按上述步驟逐級稀釋，即得混合對照品的系列標準溶液，HPLC測定。

4.按照權利要求1所述的HPLC-DAD法同時測定苦碟子注射液中五種有機酸類成分含量的方法，其特征在于步驟（3）測定法中包括精密度測定；即精密吸取混合對照品溶液，其中含有單咖啡酰基酒石酸20.40μg·mL^-1、綠原酸2.775μg·mL^-1、咖啡酸2.825μg·mL^-1、阿魏酸3.200μg·mL^-1、菊苣酸13.88μg·mL^-1，按色譜條件下，連續進樣?6?次，記錄峰面積。

5.按照權利要求1所述的HPLC-DAD法同時測定苦碟子注射液中五種有機酸類成分含量的方法，其特征在于步驟（3）測定法中包括重復性實驗；即取苦碟子注射液?1.0mL，平行實驗6次，制成供試品溶液，按色譜條件，分別測定6次，計算每種對照品的色譜峰面積。

6.按照權利要求1所述的HPLC-DAD法同時測定苦碟子注射液中五種有機酸類成分含量的方法，其特征在于步驟（3）測定法中包括穩定性實驗；即取苦碟子注射液1.0mL，室溫放置，于0、2、4、6、8、12?h進樣，按色譜條件進樣測定，記錄峰面積。

7.按照權利要求1所述的HPLC-DAD法同時測定苦碟子注射液中五種有機酸類成分含量的方法，其特征在于步驟（3）測定法中包括加樣回收率實驗；即精密量取苦碟子注射液1.0?mL，平行6份，分別置于10?mL量瓶中，分別精密加入混合對照品溶液1.0?mL，其中，單咖啡酰基酒石酸18.50?μg·mL^-1、綠原酸1.35?μg·mL^-1、咖啡酸1.07?μg·mL^-1、阿魏酸0.24?μg·mL^-1、菊苣酸12.45?μg·mL^-1，搖勻，按色譜條件進樣分析，記錄峰面積，計算加樣回收率。