[發明專利]突變型OsGBSS1酶及其制備方法與用途

有效

• 申請號: 201310069961.3
• 申請日: 2013-03-05
• 公開（公告）號: CN103695381A
• 公開（公告）日: 2014-04-02
• 發明（設計）人: 蔡秀玲;劉德瑞
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/82;C12N15/84;C12N5/10;A01H5/00;A01H5/10;C12Q1/48
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 崔佳佳;馬莉華

1.一種顆粒結合淀粉合成酶，其特征在于，所述酶在對應于SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列的一個或多個選自下組的氨基酸位點中發生突變：

(a)H236、N265、Y268、N353、R408、E410、K413或C487；

(b)A114、EA314-315或T543；或

(c)上述(a)或(b)的任意組合。

2.如權利要求1所述的顆粒結合淀粉合成酶，其特征在于，所述突變是：H236Y、N265D、Y268F、Y268W、N353A、R408A、E410D、E410Q、C487A、K413A、A114S、EA314-315QT或T543A。

3.編碼權利要求1或2所述顆粒結合淀粉合成酶的多核苷酸。

4.包含權利要求3所述多核苷酸的表達載體。

5.包含權利要求3所述多核苷酸或權利要求4所述表達載體的植物細胞。

6.一種調節顆粒結合淀粉合成酶活性的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)將待調節活性的顆粒結合淀粉合成酶的氨基酸序列與SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列作序列比對；

(2)根據調節需要從下表中選擇相應的位點進行突變：

和/或根據調節需要從下表中選擇相應的位點進行突變

和；

(3)任選的檢測所得突變體的比酶活的步驟。

7.一種制備顆粒結合淀粉合成酶活性受調節的轉基因水稻的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)將待調節活性的顆粒結合淀粉合成酶的氨基酸序列與SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列作序列比對；

(2)根據調節需要從下表中選擇相應的位點進行突變：

和/或根據調節需要從下表中選擇相應的位點進行突變

；

(3)制備編碼包含相應突變的氨基酸序列的多核苷酸或包含所述多核苷酸的表達載體；和

(4)將(3)所得多核苷酸或表達載體轉入水稻。

8.調節水稻中直鏈淀粉含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)將待調節直鏈淀粉含量的水稻植株的OsGBSS1的氨基酸序列與SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列作序列比對；

(2)根據調節需要從下表中選擇相應的位點：

或根據調節需要從下表中選擇相應的位點進行突變

；

(3)制備編碼包含相應突變的氨基酸序列的多核苷酸或包含所述多核苷酸的表達載體；

(4)將(3)所得多核苷酸或表達載體轉入水稻；和

(5)任選的檢測所得水稻中OsGBSS1的比酶活或所得水稻中直鏈淀粉含量的步驟。

9.一種生產直鏈淀粉含量受調節的稻米的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)培養權利要求7所得的轉基因水稻；和

(2)獲得所述轉基因水稻產生的稻米。

10.如權利要求1所述的顆粒結合淀粉合成酶或權利要求3所述的編碼多核苷酸的用途，其特征在于，所述酶在對應于SEQ?ID?NO:1所示氨基酸序列的一個或多個選自A114、EA314-315或T543的氨基酸位點中發生突變，所述顆粒結合淀粉合成酶或其編碼多核苷酸作為分子標記用于制備通過特異性識別A114、EA314-315或T543位點的氨基酸突變來鑒別水稻品種的試劑或試劑盒。

11.一種鑒別水稻品種的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)鑒定待鑒別水稻的GBSS1氨基酸序列中A114、EA314-315或T543位點的氨基酸、GBSS1比酶活或該水稻的直鏈淀粉含量；

(2)根據下表判斷所鑒別的水稻屬于下表中哪一品種。