[發明專利]一種親和兼容性鏈霉親和素突變體及其制備方法

有效

• 申請號: 201310069078.4
• 申請日: 2013-03-05
• 公開（公告）號: CN103242435A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 李萬波;黃勇;陜婧婧;管春愛;賈翔
• 申請（專利權）人: 盤古基因科技（蘇州）有限公司
• 主分類號: C07K14/36
• 分類號: C07K14/36;C12N15/31;C12N15/70;C12R1/465
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 姚姣陽

1.一種親和兼容性鏈霉親和素突變體，其特征在于：所述親和兼容性鏈霉親和素突變體的氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:9所示，其核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:10所示。

2.根據權利要求1所述的一種親和兼容性鏈霉親和素突變體，其特征在于：所述親和兼容性鏈霉親和素突變體包含4個氨基酸的突變，分別為Y22N、N23Y、S52G、R53D。

3.一種基于權利要求1所述的親和兼容性鏈霉親和素突變體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1）已知的具有127個氨基酸的鏈霉親和素成熟氨基酸，其氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:3所示，在其N端添加Met氨基酸作為起始密碼安置，形成128個氨基酸序列，并在其中引入兩個氨基酸的定點突變：S52G、R53D，以及兩個氨基酸的換位突變：Y22N、N23Y，得到的128個氨基酸的突變序列如序列表中SEQ?ID?NO:9所示；

2）將所述128個氨基酸的突變序列經DNAWorks逆翻譯成核苷酸序列，所述核苷酸序列的密碼子經DNAWorks優化，并且在其5’-端添加了NcoI酶切位點，3’-端添加終止密碼TAA和XhoI酶切位點，在上下游酶切位點外側各加4個保護堿基，DNA合成儀合成10條寡核苷酸引物，其核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:11～20所示；

3）將所述10條寡核苷酸引物通過PCR合成人工DNA序列，所述人工DNA序列編碼128個氨基酸的突變序列，命名為SA128m4，其核苷酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:21所示，其氨基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO:9所示，包含4個氨基酸的突變，分別為Y22N、N23Y、S52G、R53D；

4）構建原核表達工程載體pET28a-SA128m4；

5）構建原核表達工程菌株BL21(DE3)-pET28a-SA128m4；

6）原核表達工程菌株BL21(DE3)-pET28a-SA128m4的擴增、誘導表達；

7）SA128m4的提取與純化；

8）SA128m4的生物活性測定。