[發明專利]新型RNAi前體及其制備和應用

有效

• 申請號: 201310068534.3
• 申請日: 2013-03-04
• 公開（公告）號: CN104031916B
• 公開（公告）日: 2017-06-06
• 發明（設計）人: 吳立剛;尚仁福;徐蓓英
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85;C12N5/10;C12N15/10;A61K48/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司31266
• 代理人: 崔佳佳,馬莉華

1.一種RNAi前體，所述RNAi前體的核苷酸序列從5′端到3′端依次具有以下區域：

(a)5′端未配對區域，所述5′端未配對區域長度為1nt；

(b)5′端配對區域，所述5′端配對區域長度為15nt-17nt；

(c)頂端環區域，所述頂端環區域長度為3nt-9nt；

(d)3′端配對區域，所述3′端配對區域長度為15nt-17nt，并且所述5′端配對區域與3′端配對區域形成雙鏈區域，所述雙鏈區域長度為15bp-17bp；

(e)3′端未配對區域，所述3′端未配對區域長度為1nt-6nt；以及

(f)與3′端未配對區域相連的3′端核酶區，其中，

所述RNAi前體可產生siRNA，且所述siRNA的核苷酸序列對應于所述5′端配對區域和頂端環區域的核苷酸序列；

所述核酶是自剪切核酶。

2.如權利要求1所述的RNAi前體，其特征在于，所述RNAi前體中頂端環長度為4nt-6nt。

3.如權利要求2所述的RNAi前體，其特征在于，所述RNAi前體中頂端環長度為4nt。

4.如權利要求1-3中任一項所述的RNAi前體，其特征在于，所述自剪切核酶選自：HDV核酶、發夾狀核酶、錘頭狀核酶。

5.如權利要求4所述的RNAi前體，其特征在于，所述核酶是HDV核酶。

6.一種表達盒，所述表達盒包含權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體的編碼序列以及與所述編碼序列操作性相連的啟動子和終止信號，所述表達盒在轉錄后產生權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體。

7.一種構建物，所述構建物包含權利要求6所述的表達盒。

8.一種細胞，所述細胞包含權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體或權利要求6所述的表達盒或權利要求7所述的構建物。

9.一種產生siRNA的方法，所述方法包括：

1)將權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體或權利要求6所述的表達盒或權利要求7所述的構建物轉入哺乳動物細胞；和

2)培養所述哺乳動物細胞，從而在所述哺乳動物細胞中產生siRNA。

10.一種在哺乳動物細胞中實施RNAi的方法，所述方法包括：

將權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體或權利要求6所述的表達盒或權利要求7所述的構建物轉入哺乳動物細胞。

11.一種組合或組合物，所述組合或組合物包含：

1)權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體或權利要求6所述的表達盒或權利要求7所述的構建物；和

2)適合將1)所述的RNAi前體或表達盒或構建物導入哺乳動物細胞的其它試劑；

所述組合或組合物在導入哺乳動物細胞后產生siRNA或實施RNAi。

12.一種用于實施RNA干擾或產生siRNA的試劑盒，所述試劑盒包括：

1)容器，所述容器中裝有權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體或權利要求6所述的表達盒或權利要求7所述的構建物；和

2)使用說明書，所述說明書記載了利用所述試劑盒產生siRNA或實施RNA干擾的方法。

13.權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體或權利要求6所述的表達盒或權利要求7所述的構建物在哺乳動物細胞中產生siRNA，從而實施RNA干擾，進而能特異性地調控靶基因表達中的應用。

14.權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體或權利要求6所述的表達盒或權利要求7所述的構建物在制備在哺乳動物細胞中實施RNA干擾的試劑或試劑盒中的應用。

15.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含：

a)權利要求1-5中任一項所述的RNAi前體或權利要求6所述的表達盒或權利要求7所述的構建物；和

b)藥學上可接受的載體。