[發明專利]一種分離提取丹酚酸B的方法

無效

• 申請號: 201310065798.3
• 申請日: 2013-03-04
• 公開（公告）號: CN103172601A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 王驪麗;賀娜;王文鵬;屈倩
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: C07D307/86
• 分類號: C07D307/86
• 代理公司: 西安西達專利代理有限責任公司 61202
• 代理人: 謝鋼

技術領域

本發明涉及一種用高效疏水相互作用色譜（HPHIC）固定相對丹參藥材中有效成分丹酚酸B的分離制備方法，用反相液相色譜法對丹酚酸B進行質量監測，屬于天然有效成分的分離與提取技術領域。

背景技術

丹參（Radix?Salvia?miltiorrhiza）為唇形科植物干燥的根及根莖，已發現丹參的有效活性成分有70余種，被廣泛用于治療血液循環疾病、心血管疾病以及月經失調等。其中從丹參植物的水提取物中可以分離得到多種水溶性有效成分，以酚酸類為主的丹酚酸B（Salvianolia?acid?B）是丹參水溶性成分中重要的活性物質，其含量約占丹參藥材的5%，總丹酚酸類的70%。研究發現，丹酚酸B具有很強的生物活性，對脂質過氧化引起的細胞膜損傷有明顯的保護作用，有抗血小板聚集和抗血栓的作用，同時對腎功能不全和肝損傷均有一定保護作用等。丹酚酸B是由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而形成一個四聚咖啡酸類，從化學結構可以看出其化學性質不是很穩定。

目前，分離制備丹酚酸B的方法有溶劑分離法、萃取法、大孔樹脂吸附法以及高效反相液相色譜、高速逆流色譜法。但是這些分離制備方法的缺點是使大部分有效成分損失，色譜法則采用高濃度的有機溶劑(如甲醇/乙腈)作為流動相，在制備過程中氣味較大，毒性較強，易揮發、易引起環境污染等。

發明內容

本發明的目的在于提供一種安全、綠色、高效、穩定、可控的丹酚酸B的分離制備方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種分離提取丹酚酸B的方法，包括以下步驟：

（1）丹參切片加入丹參重量5～20倍的水提取并過濾得到丹參粗提液；

（2）丹參粗提液使用結構式（I）所示的高效疏水相互作用色譜介質分離，收集色譜餾分，冷凍干燥得到丹酚酸B；

???（I）

其中R為，或，或，n=10-25；

是孔徑為80～90?，粒徑為5～10μm的硅膠微球；

色譜條件：流動相A液為0.5～3?mol/L?(NH₄)₂SO₄，0～50?mmol/L?KH₂PO₄，pH?5～8；流動相B液為0～50?mmol/L?KH₂PO₄，pH?5～8；流速為0.5-2.0?mL/min；采用0-100%?B液線性梯度洗脫30?min，延長100%?B液10?min；檢測波長280-290?nm。

上述步驟（1）中，丹參切片加入重量為5～20倍的純水浸泡1～36?h后50～70℃炮制0.5～3h，1000～20000?rpm離心5～15?min，用0.45?μm微孔濾膜過濾或真空抽濾得到丹參粗提液。

上述步驟（2）中，最優的固定相中結構式（I）中R為;空白基質是孔徑為90?；粒徑為5μm高純硅膠微球；色譜條件：流動相A液為3?mol/L?(NH₄)₂SO₄，pH?7.4；流動相B液為純凈水，pH?7.4；流速為1.0?mL/min；采用0-100%?B線性梯度洗脫30?min，延長100%B液10?min；檢測波長286?nm。

采用上述分離方法提取得到的丹酚酸B的質量監控方法：丹酚酸B用50%～100%乙醇溶解，采用高效反相液相色譜和液-質聯用技術進行定性和定量分析，所述的高效反相液相色譜采用C18填料等度洗脫方式，流動相采用水：乙腈體積比為70:30～80:20，流速為0.5～1.0?mL/min。

上述結構式（I）所述的HPHIC固定相的制備方法為：以空白基質為原材料，空白基質可以是高純小孔硅膠微球或聚合物基質微球，經過活化反應，活化方法為環氧氯丙烷法，烯丙基溴法或γ-縮水甘油氧丙基三甲氧基硅烷法，然后以聚乙二醇600～1000（即PEG600～1000），苯甲醇，四氫糠醇作為配基分子，經過偶聯反應即得本發明的色譜固定相。

本發明的優點在于：（1）利用HPHIC來分離丹參制備丹酚酸B，可以達到很好的分離效果，且制備得到的丹酚酸B純度大于95%；（2）流動相采用鹽-水體系，實現了對環境無污染的要求；（3）操作簡單成熟，易于控制和放大。

附圖說明