[發明專利]一種海黍子中抗腫瘤多糖組分的提取純化方法無效

申請號：	201310065653.3	申請日：	2013-03-02
公開（公告）號：	CN103087215A	公開（公告）日：	2013-05-08
發明（設計）人：	周革非;馬偉偉;袁平;陳麗紅;邢榮蓮;滕麗	申請（專利權）人：	煙臺大學
主分類號：	C08B37/00	分類號：	C08B37/00;A61P35/00
代理公司：	煙臺雙聯專利事務所(普通合伙) 37225	代理人：	矯智蘭
地址：	264005 山***	國省代碼：	山東;37
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種黍子腫瘤多糖組分提取純化方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及一種海黍子中抗腫瘤多糖組分的提取純化方法，屬于海黍子中抗腫瘤多糖組分提取純化技術領域。

背景技術??

海黍子，為潮間帶海藻，俗稱谷穗子（山東）、茜草（福建），學名為Sargassum?kjellmanianum?Yendo。自然分布于大西洋沿岸和我國東南沿海以及青島，大連等海域，是中國的一種重要經濟海藻。海黍子具有多方面的生理活性，《本草便讀》中記載：“海藻生海中，其葉如發，即水藻之屬也咸寒潤下之品。軟堅行水，是其本功，故一切瘰癭瘤頑痰膠結之癥，皆可用之。”現代藥理實驗證明，海黍子中含有多種抗老化、抗腫瘤的成分。其化學性質包括了多肽類，糖類，萜類，生物堿類，大環內酯類和聚醚類等化合物。它們化學結構的特異性，使它們不僅顯示強烈的細胞毒作用，尚具有多種生物學功能，如免疫增強或抑制，細胞誘導分化，離子通道激活等作用。對褐藻活性物質的研究很熱門，其提取液的對小鼠腫瘤細胞S180的抗腫瘤作用早有記載，但獲得其較為純化的抗腫瘤成份還未見報道。

發明內容

本發明的目的在于解決上述已有技術存在的不足，提供一種海黍子中抗腫瘤多糖組分的提取純化方法。

本發明的一種海黍子中抗腫瘤多糖組分的提取純化方法，特殊之處在于包括以下步驟：

（一）提取多糖粗品：（1）海黍子清洗去雜、晾干并粉碎，并過100目篩；（2）將粉碎的海黍子粉末用四倍于其質量的90%的乙醇溶液中冷浸一周進行脫脂，室溫晾干；（3）于取脫脂后的海黍子粉末中加入蒸餾水，在低于70℃的恒溫水浴中抽提，取得抽提液；（4）抽提殘渣加入蒸餾水在恒溫水浴中再次抽提，合并抽提液，抽濾得上清液；（5）將上清液旋轉蒸發至提取液呈黏稠狀態，向提取液中加入無水乙醇至乙醇體積分數為30%，4℃溫度環境中置放4-8h，過濾去除其中的沉淀，于上清液中加入無水乙醇至乙醇體積分數達到總體積的60%，過濾得到的沉淀即為海黍子褐藻硫酸多糖粗品；

（二）多糖粗品提純：（1）海黍子褐藻硫酸多糖粗品去除蛋白質、小分子等雜質，真空冷凍干燥；（2）將所得的凍干粉配成水溶液層析，分別用0.1M、0.5M、1M的Nacl溶液進行洗脫，得到不同硫酸基含量的三個組分S1、S2、S3；（3）對三個組分進行相關含量測定，并對其進行腫瘤抗性實驗，對抗腫瘤活性最強的組分S2進行層析，根據不同分子量段進一步分級，得SKP1、SKP2、SKP3三個組分；（4）對SKP1、SKP2、SKP3三個組分進行抗腫瘤免疫相關的藥理學性質檢測，篩選得出具有極顯著抗腫瘤活性的多糖組分SKP2；

所述提取多糖粗品過程中，加入的蒸餾水為二十倍至三十倍海黍子粉末的質量；

所述提取多糖粗品過程中，恒溫水浴的溫度為60-70℃；

所述提取多糖粗品過程中，抽提時間為4h；

所述多糖粗品提純過程中，用Sevag法去除蛋白質，用3600Da截留分子量透析法去除小分子等雜質；

所述多糖粗品提純過程中，凍干粉配成質量分數為1%的水溶液。

SK:海黍子?英文名首字母Sargassum?Kjellmanianum；P：多糖的英文名polysaccharide首字母；1,2,3分別的代表三個組分。

本發明一種海黍子抗腫瘤多糖組分的提取純化方法，獲得一定范圍內相對分子量且含有一定量硫酸基的多糖組分，具有較為顯著的抗腫瘤作用，通過小鼠抗腫瘤實驗得到多糖組分對小鼠的免疫系統具有調節作用，為開發無毒副作用的抗腫瘤藥物奠定了基礎。

附圖說明

?圖1：本發明一種海黍子抗腫瘤多糖組分的提取純化方法的提取多糖粗品的工藝流程示意圖；

?圖2：本發明一種海黍子抗腫瘤多糖組分的提取純化方法的多糖粗品提純的工藝流程示意圖；

?圖3：標準單糖的氣相色譜圖；

?圖4：SKP1的氣相色譜圖；