[發明專利]一種利用一步法酶聯免疫技術快速檢測呋喃西林的試劑盒

無效

• 申請號: 201310065400.6
• 申請日: 2013-03-01
• 公開（公告）號: CN103197058A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 李亮;徐華莉;王旻子;張明洲;魏建良;程曄
• 申請（專利權）人: 杭州迪恩科技有限公司
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544;G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用一步法酶聯免疫技術快速檢測呋喃西林的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：呋喃西林代謝物特異性抗體、酶標板、呋喃西林代謝物辣根過氧化物酶標記物、呋喃西林代謝物標準品、酶標物稀釋液、顯色劑、清洗液、終止液和樣品稀釋液。

2.根據權利要求1所述一種利用一步法酶聯免疫技術快速檢測呋喃西林的試劑盒，其特征在于，所述呋喃西林代謝物特異性抗體包被在酶標板上。

3.根據權利要求1所述一種利用一步法酶聯免疫技術快速檢測呋喃西林的試劑盒，其特征在于，所述呋喃西林代謝物特異性抗體為動物抗呋喃西林代謝物的多克隆抗體，用呋喃西林代謝物與載體蛋白偶聯物作為免疫原通過免疫動物制得。

4.根據權利要求3所述一種利用一步法酶聯免疫技術快速檢測呋喃西林的試劑盒，其特征在于，所述動物為兔、鼠或羊。

5.一種利用一步法酶聯免疫技術快速檢測呋喃西林的方法，其特征在于，按照如下步驟進行：

(1)樣品前處理：對于肌肉、肝臟、魚、蝦的組織，供試樣用均質器均質樣本，取1.0±0.05g的均質物進行以下操作；對于蜂蜜樣品直接稱取1.0±0.05g的供試樣進行以下操作；

(2)加入4mL蒸餾水，0.5mL1M鹽酸和150μL50mM的4-硝基苯甲醛溶液，渦旋混勻30s，60℃水浴3h，每隔1h渦旋振蕩一次；

(3)加入5mL0.1M磷酸氫二鉀和0.4mL1M氫氧化鈉溶液，混勻加入6mL乙酸乙酯，振蕩1-40min，室溫條件下，4000g離心10min，收集3mL上層液體至10mL玻璃試管，50～60℃水浴氮氣吹干；

(4)加入1mL正己烷，渦旋混勻30s，然后加入1mL樣品稀釋液復溶，振蕩混勻30s，室溫條件下3000g離心5min棄去上層有機相，取下層水相50μL用于分析；對于飼料樣品，稱取1.0±0.05g粉碎的樣本加入10mL乙腈，65℃超聲波提取15min，室溫下4000rpm離心10min，取上清液2mL，于50～60℃水浴環境中氮氣吹干，加入1mL樣品稀釋工作液溶解干燥物，充分混勻后用樣品稀釋液再做10倍稀釋，取50μL用于分析；

(5)預先進行編號，標記B₀、呋喃西林代謝物標準品和樣品的位置，進行雙孔檢測；從包被有呋喃西林代謝物特異性抗體的酶標板上取下所需數量的微孔，將多余的重新密封并放回2～8℃保存；將酶標物稀釋液、樣品稀釋液、清洗液配制成工作液；在B₀孔中加入50μL0.0ng/mL呋喃西林代謝物標準品溶液；在各標準孔中加入50μL的呋喃西林代謝物標準品溶液，在各樣品孔中加入50μL樣品溶液；立即在所有孔中加入100μL的呋喃西林代謝物辣根過氧化物酶標記物，晃動反應板1-10s；室溫下溫浴30min；倒掉微孔中的液體，在所有微孔中加滿清洗液；在吸水紙上拍打；用微量移液器在每個微孔中加入100μL顯色劑，晃動酶標板使之徹底混勻，室溫下顯色10min；每孔中加入100μL終止液，混勻在450nm下檢測吸光度，分析檢測結果。