[發(fā)明專利]一種從光帽鱗傘中提取的抗腫瘤蛋白及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310064869.8 | 申請日： | 2013-03-01 |
| 公開（公告）號： | CN103102399A | 公開（公告）日： | 2013-05-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉方;張業(yè)尼;劉趙昆 | 申請（專利權(quán)）人： | 南開大學(xué) |
| 主分類號： | C07K14/375 | 分類號： | C07K14/375;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16;A61P35/00 |
| 代理公司： | 天津佳盟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12002 | 代理人： | 侯力 |
| 地址： | 300071*** | 國省代碼： | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 光帽鱗傘中 提取 腫瘤 蛋白 及其 制備 方法 | ||
1.一種光帽鱗傘（Pholiota?nameko）中提取的抗腫瘤蛋白PNAP，所述的抗腫瘤蛋白PNAP來自光帽鱗傘（Pholiota?nameko），分子量為17KDa，N-端氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示序列Ala?Gly?Arg?Thr?Phe?Ile?Gly?Tyr?Asn?Gly。
2.權(quán)利要求1所述的抗腫瘤蛋白的制備方法，其特征在于包括如下步驟：
（1）將光帽鱗傘（Pholiota?nameko）子實(shí)體研磨成粉，溶解于0.2~0.5M的NaCl溶液中，2~6℃浸提8~16小時(shí)，5000~8000rpm離心20~40min，收集上清液，即光帽鱗傘（Pholiota?nameko）子實(shí)體粗提液；
（2）向步驟（1）中的光帽鱗傘（Pholiota?nameko）子實(shí)體粗提液中加入硫酸銨至飽和度為70~100%，2~6℃放置8~16小時(shí)，10000~20000rpm離心10~40min，收集沉淀，即光帽鱗傘（Pholiota?nameko）蛋白粗提物；
（3）將步驟（2）中的光帽鱗傘（Pholiota?nameko）蛋白粗提物用20~50mM、pH6.0~9.0的PBS緩沖液溶解，然后在2~6℃、1~5倍重量的蒸餾水中透析8~16小時(shí)，反復(fù)3~5次，透析后進(jìn)行冷凍干燥，即光帽鱗傘（Pholiota?nameko）蛋白粗粉；
（4）將步驟（3）中的光帽鱗傘（Pholiota?nameko）蛋白粗粉溶解于25~50mM?MES、pH5.0~6.0的MES?A緩沖液中，上樣離子交換層析柱，用25~50mM?MES、0.5～1M?NaCl、pH5.0~6.0的MES?B緩沖液梯度洗脫，收集洗脫峰；
（5）將洗脫峰上樣凝膠層析柱，用25~50mM?MES、200~500mM?NaCl，pH5.0~6.0的MES?C緩沖液洗脫，獲得光帽鱗傘（Pholiota?nameko）抗腫瘤蛋白。
3.權(quán)利要求1所述的光帽鱗傘（Pholiota?nameko）抗腫瘤蛋白在對人乳腺癌細(xì)胞株MCF7的生長抑制中的應(yīng)用。/
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，光帽鱗傘（Pholiota?nameko）抗腫瘤蛋白對人乳腺癌細(xì)胞株MCF7的生長具有明顯的抑制作用，JC-1染色分析線粒體膜電位證明該蛋白能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
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