[發明專利]一種梔柏組合物及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310064852.2
• 申請日: 2013-03-01
• 公開（公告）號: CN104013710B
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發明（設計）人: 邊寶林;王宏潔;司南;楊健;趙海譽
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院中藥研究所
• 主分類號: A61K36/756
• 分類號: A61K36/756;A61P31/00;A61P1/02;A61P1/10;A61P17/00;A61P1/16;G01N30/02;G01N30/90
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1.一種梔柏組合物的檢測方法，其特征在于它是由黃連、黃芩、黃柏、梔子四味中藥按照3∶2∶2∶3的原料配比制成的具有治療實熱火毒、三焦熱盛之證功效的組合物，該組合物由如下方法制成：以上四味，加水浸泡1～2小時，加水煎煮1～3次，濾過，合并濾液，濃縮成稠膏，減壓干燥，粉碎成粉，即得；該組合物是丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑的原料；所述的梔柏組合物的定性鑒別方法包括以下步驟：

①取組合物粉末1～5g，加甲醇50～100ml，超聲處理20～60分鐘，濾過，濾液濃縮至5～10ml，作為供試品溶液；另取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸表小檗堿和鹽酸黃連堿對照品，分別加甲醇制成每1ml各含0.1～1mg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述五種溶液各1～5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-水＝6∶3∶1.5∶1.5∶0.5為展開劑，置濃氨試液預飽和20分鐘的層析缸內，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm波長下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

②取組合物粉末1～5g，加甲醇50～100ml，超聲處理20～60分鐘，濾過，濾液濃縮至5～10ml，作為供試品溶液；另取黃芩素、漢黃芩素對照品，加甲醇制成每1ml各含0.1～1mg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各1～10μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸＝10∶3∶1∶2為展開劑，預飽和30分鐘，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm波長下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯三個相同的暗色斑點；

③取梔柏組合物粉末1～5g，加甲醇50～100ml，超聲處理20～60分鐘，濾過，濾液濃縮至5～10ml，作為供試品溶液；另取鹽酸黃柏堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.1～1mg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述對照品溶液2～10μl，供試品溶液3～15μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝30∶15∶4的下層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和的層析缸內，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

④取梔柏組合物粉末1～5g，加50～80％甲醇10～50ml，超聲處理20～60分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；另取梔子苷對照品，加乙醇制成每1ml含1～10mg的溶液，作為對照品溶液；照《中國藥典》2010年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述二種溶液各1～10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水＝5∶5∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

⑤照高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1％甲酸為流動相進行梯度洗脫；聯用質譜，通過推導質譜的碎片信息并與已知標準品對比，指認出所述組合物中色譜峰代表的化合物，其中，所述的高效液相色譜法中，甲醇-1％甲酸為流動相，甲醇作為流動相A，按以下比例進行梯度洗脫分析供試品溶液，0-10min，10％A；10-12min，10-30％A；12-30min，30-35％A；30-35min，35-40％A；35-40min，40-55％A；40-50min，55-66％A；50-60min，66-100％A；檢測波長為254nm。

2.根據權利要求1所述的組合物的檢測方法，其特征在于該檢測方法還包括含量測定方法：

照高效液相色譜法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1％磷酸/水為流動相；乙腈作為流動相A，按以下比例進行梯度洗脫分析供試品溶液，0-9min，14％A；9-10min，14-18％A；10～30min，18-25％A；30～35min，25-30％A；35～55min，30-100％A；檢測波長254nm；分別取梔子苷、黃芩苷及鹽酸小檗堿對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml分別含0.1～0.3mg的溶液，即得對照品溶液；取梔柏組合物粉末10～100mg，精密稱定，加甲醇1～10倍體積份，超聲處理20～80分鐘，放冷，定容，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液；分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～20μl注入液相色譜儀，檢測。