[發明專利]一種亞砜生物堿類化合物及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201310064261.5
• 申請日: 2013-02-28
• 公開（公告）號: CN103145740A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 趙心清;矯文策;白鳳武
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C07D519/00
• 分類號: C07D519/00;A61K31/439;A61P35/00;A61P11/00;A61P1/16;A61P35/02;A61P31/04;C12P17/18;C12R1/465
• 代理公司: 大連星海專利事務所 21208
• 代理人: 花向陽

技術領域

本發明涉及一種亞砜生物堿類化合物及其制備與應用，屬于微生物技術領域。

背景技術

隨著抗生素在臨床上的普遍應用,??臨床上耐藥性病原菌不斷出現以及近年來出現的SARS、禽流感和超級細菌”，迫切需要開發新的抗生素類藥物。放線菌生產的活性物質很多具有醫藥和植物保護方面的用途,已廣泛用作抗細菌、抗真菌和抗腫瘤藥物。現在已發現的數萬種微生物來源的生物活性物質中,約有70%是由放線菌所合成的。然而，隨著陸地放線菌的過度開發，發現新穎生物活性化合物的幾率逐年降低。海洋微生物生活在高壓、高鹽、寡營養等特殊環境中,??形成了獨特的生長和代謝方式,?與陸地微生物相比更有可能產生結構新穎、功能獨特的次級代謝物,?具有巨大的開發潛力。

海洋鏈霉菌（Streptomyces?xinghaiensis?NRRL?B24674^T）是本實驗室于2006年分離自大連星海灣水下20米海泥樣品中，經過16S?rRNA，形態和生理生化實驗確定為一株新的海洋鏈霉菌。前期研究表明，海洋鏈霉菌發酵液粗提物對大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌，銅綠假單胞菌具有不同程度的抑制作用。

亞砜類化合物由于具有廣譜的生物活性，如殺蟲活性、抗菌活性、抗腫瘤活性、除草劑活性等，受到國內外學者的普遍關注，但天然亞砜類化合物報道很少，已有的報道常常來自于陸地植物中，如分離自牙甘藍（Brussels?sprouts）?中的S-methyl-cysteine?sulfoxid和西西里蜜蒜（Allium?siculums）中的S-alk(en)yl-L-cysteine?sulfoxide,?S-n-butyl-cysteine?sulfoxide。在海洋無脊椎動物中，如海綿(Pseudoceratina?purpurea)和海鞘?(Polycitor?sp.)中也分離得到少量的亞砜類化合物，如psammaplin?N,?eudistomin?K,?lehualides?J,?varacins?B?和?varacins?D,?eudistomidin?E?和aplisulfamines等。到目前為止，還沒有亞砜類化合物從海洋微生物中發現得到。

發明內容

本發明的目的在于提供一種具有藥用價值的新化合物及其制備方法和該化合物在抗菌及抗腫瘤治療中的應用。

本發明采用的技術方案是：一種亞砜生物堿類化合物的分子結構式I為：

在I式中：R₁為

所述的亞砜生物堿類化合物的制備方法：將海洋鏈霉菌接種到胰蛋白胨大豆肉湯液體培養基中，28-30℃，180-200rpm培養48-72h，以10%接種量接種到發酵培養基中，28-30℃，180-200rpm培養432-456h，發酵液經分離純化法得到亞砜生物堿類化合物。

所述分離純化法如下：將6升發酵液6000?r/min離心10?min，得到發酵液上清液與菌絲體；上清液以1:2的比例與乙酸乙酯混合，反復萃取三次，并使用旋轉蒸發儀蒸干，得到的上清液乙酸乙酯提取物；菌絲體使用等體積比甲醇/丙酮破壁浸提12h后，6000?r/min離心10?min后取上清液，得到甲醇/丙酮菌絲體提取物，使用旋轉蒸發儀除去甲醇/丙酮，并用乙酸乙酯萃取，得到菌絲體乙酸乙酯提取物，將上清液與菌絲體的乙酸乙酯提取物合并后得到發酵液粗提物；將發酵液粗提物過硅膠柱，干法上柱，以乙酸乙酯-二氯甲烷和甲醇-乙酸乙酯進行梯度洗脫，在洗脫前首先用二氯甲烷平衡，然后按照如下洗脫梯度，用100毫升的不同梯度洗脫液進行洗脫，洗脫梯度分別為純二氯甲烷，二氯甲烷：乙酸乙酯=2:1、二氯甲烷：乙酸乙酯=1:1、二氯甲烷：乙酸乙酯=1:2，純乙酸乙酯，乙酸乙酯：甲醇=2:1、乙酸乙酯：甲醇=1:1、乙酸乙酯：甲醇=1:2，純甲醇，以上洗脫梯度均為體積比；得到9個組分，以金黃色葡萄球菌為指示菌進行活性檢測，結果顯示組分5具有拮抗金黃色葡萄球菌的活性；以C18反相柱對組分5進行分離，分別用濃度為30%、60%、80%和100%的甲醇進行洗脫，結果顯示80%的甲醇洗脫液具有拮抗金黃色葡萄球菌的活性；對該組分進行高效液相色譜檢測，并在半制備型HPLC進行制備，得到所述亞砜生物堿類化合物。