[發明專利]復合材料固定化赤霉菌制備煙酸的方法

有效

• 申請號: 201310063189.4
• 申請日: 2013-02-28
• 公開（公告）號: CN103103228A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 史勁松;李恒;楊濤;龔勁松;許正宏;孫文敬;周強
• 申請（專利權）人: 江南大學;江西省德興市百勤異VC鈉有限公司
• 主分類號: C12P17/12
• 分類號: C12P17/12;C12N11/10;C12N11/08;C12R1/645
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1.一種利用固定化赤霉菌CA3-1（編號CGMCC?No.4903）細胞制備煙酸的方法，其特征在于將腈水解酶產生菌經過液體培養得到菌液，分別利用聚乙烯醇、殼聚糖和聚乙烯醇-殼聚糖復合材料進行赤霉菌CA3-1的全細胞固定化，并用于煙酸的生物轉化。

2.?根據權利要求1所述的方法，聚乙烯醇固定化的特征是腈水解酶產生菌經過液體培養得到菌液，經過離心分離獲得菌體，用生理鹽水離心洗滌后重懸于生理鹽水中，得到濃度為8-12g/L的菌懸液；取3-8mL菌懸液加入3-8mL?4-10%聚乙烯醇溶液，混合均勻后用注射器平穩的注入到含有飽和硼酸固化溶液中，于-4-10℃下，固化2-8h，得到的固定化小球經過濾、洗去表面未固定的細胞和混合固化溶液，最后將固定化細胞保存在0-10℃的生理鹽水中，以備用于生物轉化制備煙酸。

3.根據權利要求1所述的方法，殼聚糖固定化其特征是腈水解酶產生菌經過液體培養得到菌液，經過離心分離獲得菌體，用生理鹽水離心洗滌后重懸于生理鹽水中，得到濃度為8-12g/L的菌懸液；取3-8mL菌懸液加入3-8mL?2-8%殼聚糖溶液中，混合均勻后用注射器平穩的注入到質量體積比為10%的多聚磷酸鈉固化溶液中，于-4-10℃下，固化2-8h，得到的固定化小球經過濾、洗去表面未固定的細胞和混合固化溶液，最后將固定化細胞保存在0-10℃的生理鹽水中，以備用于生物轉化制備煙酸。

4.根據權利要求1所述的方法，聚乙烯醇-殼聚糖固定化其特征是腈水解酶產生菌經過液體培養得到菌液，經過離心分離獲得菌體，用生理鹽水離心洗滌后重懸于生理鹽水中，得到濃度為8-12g/L的菌懸液；取3-8mL菌懸液加入3-8mL?0.5-6%聚乙烯醇溶液和1-6%的殼聚糖溶液的混合溶液，混合均勻后用注射器平穩的注入到含有飽和硼酸和6-15%的多聚磷酸鈉的混合固化溶液中，于-4-10℃下，固化2-8h，得到的固定化小球經過濾、洗去表面未固定的細胞和混合固化溶液，最后將固定化細胞保存在0-10℃的生理鹽水中，以備用于生物轉化制備煙酸。

5.根據權利要求1所述的方法，分別取2-12mL的固定化小球參與反應，加入3-8mL?pH值6.0-10.0?的PBS緩沖液，加50-150mM底物3-氰基吡啶3-8mL，在30-50℃、pH值為6.0-10.0的條件下反應20-45min，得到產物煙酸和副產物煙酰胺的混合溶液。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征是腈水解酶產生菌液體培養的培養基組成為葡萄糖?6-12g，酵母粉?5-10g，磷酸二氫鉀?1-5g，氯化鈉?1-6g，硫酸亞鐵?0.01-0.1g，己內酰胺?1-5g，加水至1L，pH為7.0；培養條件為500mL三角瓶裝液30-60mL，于25-35℃、180-220rpm搖床培養36-72h。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征是用于固定化的腈水解酶產生菌是編號為CGMCC?No.?4903的赤霉菌CA3-1。