[發(fā)明專利]一種分離純化重組蛋白A的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310061920.X
• 申請(qǐng)日: 2013-02-27
• 公開（公告）號(hào): CN103145813A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳校園;余波光;張海珍;周彤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州康盛生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/31
• 分類號(hào): C07K14/31;C07K1/14;C07K1/20
• 代理公司: 珠海智專專利商標(biāo)代理有限公司 44262
• 代理人: 許淑文

1.一種分離純化蛋白A的方法，其步驟如下：

（1）菌體懸浮液加熱處理；

（2）對(duì)步驟（1）所得破碎上清第一次活性炭吸附；

（3）對(duì)步驟（2）所得上清溶液第二次活性炭吸附。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離純化蛋白A的方法，其特征在于還包括步驟（4）：將步驟（3）中獲得的蛋白A溶液上樣至已用緩沖液平衡的疏水相互作用層析柱，收集穿流峰，得精純蛋白A溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離純化蛋白A的方法，其步驟如下：

（1）取含重組蛋白A的菌體，用PBS緩沖液混勻菌體，加入溶菌酶，水浴攪拌后，置于沸水浴攪拌，冷卻后離心得破碎上清；

（2）破碎上清中加入無機(jī)鹽?、Triton?X-100，攪拌均勻后，加入活性炭，置水浴中攪拌進(jìn)行第一次吸附，離心得上清溶液；

（3）上步所得的上清溶液中，再加入無機(jī)鹽、Triton?X-100，攪拌均勻后，加入活性炭，置水浴中攪拌進(jìn)行第二次吸附，離心后得蛋白A溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種分離純化蛋白A的方法，其特征在于還包括步驟（4）：將步驟（3）中所得的蛋白A溶液上樣至已用PBS緩沖液平衡的疏水相互作用層析柱，收集穿流峰，即得精純蛋白A溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種分離純化蛋白A的方法，其步驟如下：

（1）取含重組蛋白A的菌體，用4倍體積重量比的PBS緩沖液混勻菌體，加入溶菌酶至濃度為1mg/ml，于60℃水浴攪拌1h，置于沸水浴攪拌30min，冷卻后離心得破碎上清，所述PBS緩沖液為含濃度為8.0mmol/L的磷酸氫二鈉、2.0mmol/L的磷酸二氫鉀和131mmol/L的NaCl的混合溶液；

（2）破碎上清中加入無機(jī)鹽至濃度增加了0.3mol/L?，加入Triton?X-100至體積百分濃度為0.5-4%（v/v），攪拌均勻后按重量體積比加入4%的活性炭，置60℃水浴中攪拌4h進(jìn)行第一次吸附，離心得上清溶液；

（3）再加入無機(jī)鹽至濃度增加了0.3mol/L?，加入Triton?X-100至體積百分比濃度增加了0.5-4%（v/v），攪拌均勻后按重量體積比加入4%活性炭，置60℃水浴中攪拌4h進(jìn)行第二次吸附，離心后得蛋白A溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種分離純化蛋白A的方法，其特征在于還包括步驟（4）：將步驟（3）中所得的蛋白A溶液上樣至已用PBS緩沖液平衡的疏水相互作用層析柱，收集穿流峰，即得精純蛋白A溶液，所述PBS緩沖液為含濃度為8.0mmol/L的磷酸氫二鈉、2.0mmol/L的磷酸二氫鉀、1.5mol/L的NaCl、體積百分比濃度為0.5%的Triton?X-100的混合溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求?5所述的一種分離純化蛋白A的方法，其特征在于：步驟（2）所述的加入Triton?X-100至體積百分比濃度為2%（v/v）；步驟（3）所述的加入Triton?X-100至體積百分比濃度增加為2%（v/v）。

8.根據(jù)權(quán)利要求3或5所述的一種分離純化蛋白A的方法，其特征在于：所述無機(jī)鹽選自含有鈉、鉀或銨離子的無機(jī)鹽。

9.根據(jù)權(quán)利要求3或5所述的一種分離純化蛋白A的方法，其特征在于：所述無機(jī)鹽選自NaCl、KCl或硫酸銨。

10.根據(jù)權(quán)利要求2、4或6所述的一種分離純化蛋白A的方法，其特征在于：所述的疏水相互作用層析柱所用介質(zhì)為苯基瓊脂糖凝膠6?FF。