[發明專利]一種霍山石斛的快速繁殖方法

無效

• 申請號: 201310061665.9
• 申請日: 2013-02-28
• 公開（公告）號: CN104012401A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 毛健;姬中偉;張敏;牟穰;陽志銳;郭燕飛;黎衛;馮東陽;鞏丹;劉蕓雅
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

所屬領域：本發明涉及生物技術領域，具體地，涉及霍山石斛的快速繁殖方法。

背景技術：霍山石斛是蘭科石解屬藥用植物，在自然條件下，種子需與真菌共生才能萌發，發芽率極低。極低的繁殖率和人們長期無節制的采挖使野生鐵皮石斛資源日漸枯竭，市場急缺。解決霍山石斛市場需求問題的有效途徑就是要擴大種植面積和種植地域，因此種苗來源尤其是優質種苗的篩選成為函待解決的問題。最有效的方法就是通過植物組織培養技術進行人工快速繁優良種苗。

發明內容：本發明的目的在于提供一種石斛種苗快速繁殖方法，以挽救瀕危的石斛類物種，使之成為可再生藥源，并為石斛類GAP種植提供技術參考和實用價值。為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案：

霍山石斛的快速繁殖方法：取石斛果實內種子或莖尖或帶腋芽的幼莖，果在純乙醇中浸一下，然后在酒精燈火焰上燃燒，然后用于接種；莖尖或幼莖經清水沖洗后，分別用75％酒精、0.2％氯化汞(升汞)溶液進行表面消毒，無菌水沖洗3-4次，置于滅菌后的濾紙上吸干水分，于無菌條件下，將莖段剪成0.5-1.5cm的帶節小段，接種在培養基中，待種子萌發或莖尖和幼莖長成擬原球莖，進行繼代培養大量增殖，然后將原球莖放在分化芽的培養基上，待芽條高2-3cm時轉入生根培養基，待試管苗具4-5片伸展葉，根系正常，高度達6cm及以上時，出瓶移栽。

具體地，取野外采集或雜交授粉所結的果實，在酒精燈燃燒滅菌后，在無菌條件下將果皮打開，將種子播種在花寶1號(N∶P∶K＝7∶6∶19)3g/L的瓊脂培養基上；而開裂果用尼龍布包裹散落種子，在0.2％HgCl₂中消毒6-8min，無菌水沖洗干凈后播種在花寶1號(N∶P∶K＝7∶6∶19)3g/L的瓊脂培養基上；未成熟的果內種子可播種在花寶1號3g/L+NAA1mg/L的瓊脂培養基上，培養室溫度25±2℃，光照強度為1500-2000Lx，光照12h/d，培養基PH為5，培養8-12天種子由黃色轉綠，呈球形增大，基部有絲狀毛的原球莖，繼代培養在1/2MS+NAA1+土豆泥3％+香蕉泥15％的瓊脂培養基上，30天后，分化出1cm小芽和0.5cm叢芽，又經過1-2個月的培養可得到高約2-3cm芽條，轉入1/2MS+NAA1+土豆泥3％+香蕉泥15％的生根壯苗培養基培養1個月后加強光照至4000Lx，培養一個月，當試管苗具4-5片伸展葉，根系正常，高度達6cm時，即可出瓶供移栽，出瓶時清除根系上的瓊脂，3-5株一叢種植，種植基質有鋸末、樹皮、苔薛和陶粒等，基質要用20∶1的水∶甲醛密封消毒24h或用熱蒸汽消毒，栽后放在蔭蔽度70％大棚內，棚內溫度控制在20℃-28℃，注意保濕和排水，8-16天用1/10MS液噴施一次，待試管苗長出新根或新葉后便可定植。

具體地，將野外采集到的石斛莖尖或帶腋芽的幼莖切段滅菌后接種在1/2MS+NAA1mg/L+土豆泥3％十香蕉泥15％的瓊脂培養基上，培養室溫度保持為25±2℃，光照強度為1500-2000Lx，光照12h/d，培養基PH為5，培養30-60天，腋芽處可抽生新枝，新枝可切割重復培養，莖尖抽生新枝短呈叢芽狀，在上述培養基上繼續培養，長成完整試管苗供移栽，出瓶時清除根系上的瓊脂，3-5株一叢種植，種植基質有鋸末、樹皮、苔鮮和陶粒等，基質要用20∶1的水∶甲醛密封消毒24h或用熱蒸汽消毒，栽后放在大棚內蔭蔽度70％，棚內溫度控制在20℃-28℃，注意保濕和排水，8-16天用1/10MS液噴施一次。

具體實施方式：

實施例1：

1材料與方法

1.1供試材料

霍山石斛：選自廣南、思茅、浙江、盈江

1.2方法

培養室溫度25±2℃，保存室溫度15-20℃，光照強度為1500-2000Lx，光照12h/d。培養基隨培養目的和不同發育階段有所不同。培養基PH為5。

外植體來源于石斛屬各種的果實內種子或莖尖，果在純乙醇中浸一下，然后在酒精燈火焰上燃燒，然后用于接種；莖尖或幼莖經清水沖洗后，分別用75％酒精、0.2％氯化汞(升汞)溶液進行表面消毒，無菌水沖洗3-4次，置于滅菌后的濾紙上吸干水分，于無菌條件下，將莖段剪成0.5-1.5cm的帶節小段，接種在培養基中。

2結果

2.1組織培養和快速繁殖技術

本發明為了保持遺傳性穩定和規模化生產目的，采用了種子無菌培養和莖尖、莖節分生組織培養兩種方式。

2.1.1種子無菌培養