[發明專利]黃瓜黑色果刺基因B連鎖的SSR標記引物及其應用

有效

• 申請號: 201310061177.8
• 申請日: 2013-02-27
• 公開（公告）號: CN104004749A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 張圣平;顧興芳;苗晗;劉書林;王燁
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

1.黃瓜黑色果刺基因B緊密連鎖的SSR標記引物，其特征在于：

SSR07209-F/SSR07209-R：

CTGTCTGCAGAGCCATCTGA/CCATCAAGTTGAGGAGCAAA；

所述SSR標記引物擴增的與黃瓜白色果刺基因b連鎖的特征條帶為192bp，核苷酸序列如Seq?ID?No.1所示；

所述SSR標記引物擴增的與黃瓜黑色果刺基因B連鎖的特征條帶為178bp，核苷酸序列如和Seq?ID?No.2所示。

2.權利要求1所述SSR標記引物在篩選具有白色果刺基因b的黃瓜種質資源中的應用，其步驟如下：

（1）采用上述SSR標記引物對待選黃瓜品種的基因組DNA分別進行PCR擴增；

（2）對擴增結果進行凝膠電泳檢測；

（3）從檢測結果中選出出現與黃瓜白色果刺基因b連鎖的特征條帶的材料，去掉出現與黃瓜黑色果刺基因B連鎖的特征條帶的材料。

3.根據權利要求2所述的應用，所述PCR反應體系為:7.5ng?DNA模板，正向和反向引物各50ng，5μL?Go?TaqGreen?Master?Mix，加雙蒸水至10ul。

4.根據權利要求2所述的應用，所述PCR擴增程序為：94℃預變性4分鐘；94℃變性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒，35個循環；72℃保溫5分鐘，16℃保存。

5.根據權利要求2～4任一所述的應用：所述凝膠電泳檢測：指采用6％的非變性聚丙烯酰胺凝膠，于150V恒功率電泳分離，最后銀染顯色。