[發(fā)明專利]一種博來霉素族衍生物的分離和純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310060071.6
• 申請日: 2013-02-26
• 公開（公告）號: CN104004065B
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 段燕文;沈奔;朱湘成;楊虎
• 申請（專利權(quán)）人: 長沙天賜生物醫(yī)藥科技有限公司;長沙慈航藥物研究所有限公司;哈藥慈航制藥股份有限公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00;C07K1/36;C07K1/18
• 代理公司: 長沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司43113
• 代理人: 馬強(qiáng)

1.一種博來霉素族衍生物的分離和純化方法，其特征是，具體步驟為：

(1)收集黃綠鏈霉重組工程菌SB9026經(jīng)過發(fā)酵培養(yǎng)后得到的發(fā)酵液，加入十二水合硫酸鋁鉀，每升發(fā)酵液中加入十二水合硫酸鋁鉀0.4g-0.6g，充分?jǐn)嚢韬?，靜置25-30分鐘后再加入硅藻土，每升發(fā)酵液中加入硅藻土5g-6g，攪拌后進(jìn)行固液分離，得到pH值為6-8的發(fā)酵上清液；所述黃綠鏈霉重組工程菌SB9026的保藏號為CCTCC M 2011292；

(2)向步驟(1)得到的發(fā)酵上清液中加入D113型弱酸性陽離子交換樹脂富集吸附1-2小時，每升發(fā)酵上清液中加入D113型弱酸性陽離子交換樹脂90ml-110ml；將吸附后的D113型弱酸性陽離子交換樹脂裝入分離柱I并用去離子水沖洗至洗提液無色，然后用1.5-2.5倍于分離柱I柱體積的質(zhì)量濃度為0.4％-0.5％的NaCl溶液沖洗樹脂柱，最后用質(zhì)量濃度為10％-12％的NaCl溶液進(jìn)行洗提，收集洗提液；

(3)將步驟(2)得到的洗提液與450ml-550ml Diaion HP-20樹脂混合并在20-25℃的溫度下震蕩25min-35min進(jìn)行吸附，將Diaion HP-20樹脂裝入分離柱II后4.5-5.5倍于分離柱II柱體積的去離子水沖洗并排干殘余水，然后用0.5-1.5倍分離柱體積的純甲醇進(jìn)行洗提，收集的甲醇洗提液濃縮蒸干后得到粗提物；

(4)將步驟(3)得到的粗提物用質(zhì)量濃度為4％-5％的甲醇去離子水溶液溶解，離心去除不溶物后所得的上清液載入Silica Flash柱，并用4％-5％的甲醇去離子水溶液進(jìn)行等梯度洗提，直至洗提液中不含目標(biāo)產(chǎn)物6’-脫羥基-BLM S為止，收集洗提液合并濃縮后得到淺藍(lán)色銅離子復(fù)合物粗品；

(5)將步驟(4)得到的銅離子復(fù)合物粗品脫銅精制：每1克銅離子復(fù)合物粗品用15ml-20ml甲醇溶解，得復(fù)合物溶液；每0.2g二乙基二硫代氨基甲酸鈉用2ml-3ml甲醇溶解，得二乙基二硫代氨基甲酸鈉溶液；將復(fù)合物溶液與二乙基二硫代氨基甲酸鈉溶液充分混合，得混合溶液，使得混合溶液中銅離子復(fù)合物粗品與二乙基二硫代氨基甲酸鈉的質(zhì)量比為1:0.2-0.3；將混合溶液離心得到上清液，將上清液與丙酮按1:4-5的體積比充分混合，離心后去上清液，沉淀物用丙酮淋洗2-3次后在62℃-68℃下常壓恒溫干燥，得到不含銅離子的粗純化產(chǎn)物；每1克的粗純化產(chǎn)物用50ml-60ml去離子水充分溶解后，加入丙酮直至丙酮質(zhì)量濃度達(dá)到65％-70％，在4℃-5℃的環(huán)境下靜置18-20小時后進(jìn)行離心處理，將離心處理后所得的上清液濃縮蒸干，得到不含銅離子的純化6’-脫羥基-BLM S。