[發明專利]一個高效抽提茄科類種子RNA的方法無效
| 申請號： | 201310059916.X | 申請日： | 2013-02-26 |
| 公開（公告）號： | CN103074330A | 公開（公告）日： | 2013-05-01 |
| 發明（設計）人： | 韓芹芹;高凱;宋玉竹;張金陽 | 申請（專利權）人： | 昆明理工大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 650093 云*** | 國省代碼： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一個 高效 抽提茄科類 種子 rna 方法 | ||
1.一種高效抽提茄科類種子RNA的方法，其特征在于按如下步驟進行：
取茄科類植物的新鮮種子或干種子用質量百分比濃度為10~15%的次氯酸鈉消毒10~15min后，用滅菌水清洗3~4次，將種子切開，加入液氮充分研磨成粉狀；
取研磨后的樣品80~100mg，加入滅菌的提取液和苯酚各100~120ul，充分渦旋，在冰水混合物中冰浴10~20min，離心；
離心后吸取上清液，按每毫升上清液添加500~600ul三氯甲烷/異戊醇混合液的比例在上清液中加入三氯甲烷/異戊醇混合液，充分渦旋，離心收集最上層的上清液，然后按每毫升上清液添加500~600ul苯酚/三氯甲烷混合液的比例在上清液中加入苯酚/三氯甲烷混合液，再抽提一次，離心，收集上清液；
按每毫升上清液中添加1ml異丙醇的比例在上清液中加入預冷至-20℃的異丙醇，混勻靜置5~10min，離心，棄上清液，加入1~1.5ml質量百分比濃度為?75%的乙醇清洗，離心棄去乙醇后，即得膠體狀RNA，干燥5~10min后用焦磷酸二乙酯溶液溶解，檢測濃度后置于-20℃備用。
2.根據權利要求1所述高效抽提茄科類種子RNA的方法，其特征在于：提取液包括1%?的十二烷基肌氨酸鈉、100mM?的Tris-HCl、280mM?的NaCl、10mM的?EDTA、10ul/ml的β-巰基乙醇，提取液的PH值為?8.5。
3.根據權利要求1所述高效抽提茄科類種子RNA的方法，其特征在于：三氯甲烷/異戊醇混合液中三氯甲烷與異戊醇的體積比為23:1~25:1。
4.根據權利要求1所述高效抽提茄科類種子RNA的方法，其特征在于：苯酚/三氯甲烷混合液中苯酚與三氯甲烷的體積比為1:1~1.2:1。
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