[發明專利]WRKY轉錄因子多肽基因應用的載體和方法

有效

• 申請號: 201310058304.9
• 申請日: 2013-02-25
• 公開（公告）號: CN104004767B
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 高陽;劉軍華;呂貴華;毛冠凡;王昌貴;王喜萍;夏勉;于昆
• 申請（專利權）人: 先鋒海外公司;北京凱拓迪恩生物技術研發中心有限責任公司
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00;A01H5/10;A01H1/02;A01H6/46;A01H6/20;C12Q1/6895
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李慧惠;權陸軍

本發明揭示了分離的多聚核苷酸和多肽，用于提高植物耐旱性的重組DNA載體，含有這些重組DNA載體的植物或種子，以及利用這些重組DNA載體的方法。重組DNA載體含有植物中有功能的啟動子和與之連接的多聚核苷酸，其中，所述的多聚核苷酸編碼轉錄因子WRKY多肽。

技術領域

本發明涉及植物育種和遺傳學，特別是，涉及用于提高植物耐旱性能的重組DNA載體。

發明背景

非生物脅迫是世界范圍內引起作物減產的主要原因，每年會造成主要作物減產50％以上(Boyer，J.S.(1982)Science218：443-448；Bray，E.A.等(2000)In Biochemistryand Molecular Biology of Plants，edited by Buchannan，B.B.等，Amer.Soc.PlantBiol.，pp.1158-1249)。干旱是所有非生物脅迫中影響作物產量最主要的因素，在植物生長發育階段，干旱會激活植物各種不同生理和發育變化。近年來，盡管對非生物脅迫響應的分子機制和植物耐旱性的遺傳調控網絡進行了廣泛的研究(Valliyodan，B.和Nguyen，H.T.(2006)Curr.Opin.Plant Biol.9：189-195；Wang，W.等(2003)Planta218：1-14；Vinocur，B.和Altman，A.(2005)Curr.Opin.Biotechnol.16：123-132；Chaves，M.M.和Oliveira，M.M.(2004)J.Exp.Bot.55：2365-2384；Shinozaki，K.等(2003)Curr.Opin.Plant Biol.6：410-417；Yamaguchi-Shinozaki，K.和Shinozaki，K.(2005)Trends Plant Sci.10：88-94)，但是植物如何感受、傳導干旱脅迫信號和其耐旱性的生物化學和分子機制仍然是生物學研究中面臨的一個主要挑戰。

早期非生物脅迫響應分子方面的研究主要借助差異和/或加減法分析(Bray，E.A.(1993)PlantPhysiol.103：1035-1040；Shinozaki，K.和Yamaguchi-Shinozaki，K.(1997)PlantPhysiol.115：327-334；Zhu，J.-K.等(1997)Crit.Rev.Plant Sci.16：253-277；Thomashow，M.F.(1999)Annu.Rev.Plant Physiol.Plant Mol.Biol.50：571-599)；和其它的方法，如分離候選基因，分析脅迫條件下該基因的表達或活性產物，或進行特定脅迫條件下功能互補分析(Xiong，L.和Zhu，J.-K.(2001)Physiologia Plantarum112：152-166)。另外，用于鑒定和分離調控基因突變體的正向和反向遺傳學研究為脅迫條件下基因表達的變化提供了證據(Xiong，L.和Zhu，J.-K.(2001)Physiologia Plantarum112：152-166)。

激活標簽可以用于鑒定影響植物性狀的基因，這一方法已經用于模式植物擬南芥的研究中(Weigel，D.等(2000)PlantPhysiol.122：1003-1013)。轉錄增強子序列的插入主要激活和/或提高鄰近內源基因的表達，因此該方法可以用于分離具有重要農藝性狀表型的基因，包括提高非生物脅迫如耐旱性的基因。

WRKY轉錄因子是植物中發現的N-端含有WRKYGQK高度保守氨基酸序列的轉錄調控因子，它能夠與(T)(T)TGAC(C/T)序列(W-box)發生特異性作用，調節啟動子中含W-box元件的調節基因和/或功能基因的表達，從而參與植物的各種防衛反應，調節植物的生長發育。作為WRKY轉錄因子家族中的一員，水稻WRKY轉錄因子66(OsWRKY66)也含有保守的WRKYGQR氨基酸序列。

發明概述

本發明包括以下具體實施例：