[發(fā)明專利]一種苯丙氨酸定量檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310057261.2
• 申請日: 2013-02-22
• 公開（公告）號: CN103196897A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發(fā)明（設計）人: 劉賓;楊曉林;孫旭東;孫中鋒;李鵬聰;張鑫;李瑞娟
• 申請（專利權）人: 北京源德生物醫(yī)學工程有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊;姜義民

1.一種苯丙氨酸定量檢測試劑盒，包括苯丙氨酸脫氫酶、輔酶β-NAD、輔酶FMN、長鏈脂肪醛、FMN-NADH氧化還原酶、細菌熒光素酶、0.05mol/L?pH10.0的Gly-NaOH緩沖液、0.1mol/L?pH7.0的K₂HPO₄-KH₂PO₄緩沖液。

2.如權利要求1所述的定量檢測試劑盒，其特征在于，所述長鏈脂肪醛為正葵醛。

3.如權利要求1所述的定量檢測試劑盒，其特征在于，所述FMN-NADH氧化還原酶和細菌熒光素酶為sigma公司的含細菌熒光素酶的NAD(P)H:FMN-氧化還原酶，其貨號為L8507。

4.如權利要求1所述的定量檢測試劑盒，其特征在于，還包括BSA。

5.一種苯丙氨酸的定量檢測方法，包括如下步驟：

（1）使用0.05mol/L?pH10.0的Gly-NaOH緩沖液配制苯丙氨酸脫氫酶溶液、輔酶β-NAD溶液，備用；

（2）向含苯丙氨酸的待測樣品中加入步驟（1）所配制的輔酶β-NAD溶液、苯丙氨酸脫氫酶溶液，使苯丙氨酸發(fā)生脫氫反應生成苯丙酮酸，同時輔酶β-NAD被還原為β-NADH；

（3）使用0.1mol/L?pH7.0的K₂HPO₄-KH₂PO₄緩沖液配制輔酶FMN溶液、長鏈脂肪醛溶液、FMN-NADH氧化還原酶溶液、細菌熒光素酶溶液，備用；

（4）向步驟（2）所得反應混合物中加入步驟（3）所配制的輔酶FMN溶液、長鏈脂肪醛溶液、FMN-NADH氧化還原酶溶液和細菌熒光素酶溶液進行發(fā)光反應，3-5min內測定相對發(fā)光強度，根據(jù)校準品苯丙氨酸濃度與相對發(fā)光強度之間的線性關系，計算出樣本中的苯丙氨酸含量。

6.根據(jù)權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述苯丙氨酸脫氫酶在步驟（2）所述反應體系中的終濃度為10~50mIU/L。

7.根據(jù)權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述輔酶β-NAD在步驟（2）所述反應體系中的終濃度為0.5~3mmol/L。

8.根據(jù)權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述輔酶FMN在步驟（4）所述反應體系中的終濃度為2~10μmol/L。

9.根據(jù)權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述長鏈脂肪醛為正葵醛。

10.根據(jù)權利要求9所述的檢測方法，其特征在于，所述正葵醛在步驟（4）所述反應體系中的終濃度以體積百分比計為0.1%~1%。

11.根據(jù)權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，步驟（3）、（4）所述長鏈脂肪醛溶液還包含BSA。

12.根據(jù)權利要求11所述的檢測方法，其特征在于，所述BSA在步驟（4）所述反應體系中的質量體積百分比以g/ml計為0.1%～1%。