[發明專利]鑒定大豆Lox1和Lox3缺失體的多重PCR引物及其方法

無效

• 申請號: 201310055956.7
• 申請日: 2013-02-21
• 公開（公告）號: CN103160579A
• 公開（公告）日: 2013-06-19
• 發明（設計）人: 張文明;胡明建;王曉波;姚大年;鄭文寅;司紅起
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 安徽匯樸律師事務所 34116
• 代理人: 胡敏

技術領域

本發明涉及一種鑒定大豆Lox1和Lox3缺失體的多重PCR引物及其方法，主要應用于分子標記的技術領域。

背景技術

大豆脂肪氧化酶（Lox）是一種含非血紅素鐵、水溶性球蛋白質。Lox通過催化不飽和脂肪酸中順，順1,4-戊二烯結構，形成過氧化氫衍生物，再繼續轉化成低級的醛和酮等有害物質，從而產生豆腥味和其他揮發性物質，阻礙了大豆在食品中的廣泛應用。Lox催化產生的過氧化氫物，能直接與食品中的營養成分結合，降低食品的食用品質和營養價值。高溫處理可減輕大豆豆醒味,?但會導致蛋白質變性,?使蛋白質加工性能和利用率降低。此外，通過微波照射、改變介質pH、有機溶劑萃取和醛水解酶水解等方法，也可以降低或消除大豆豆腥味。上述方法都會不同程度增加大豆產品成本，且常常會導致大豆蛋白質溶解度下降，降低食品營養價值。因此，通過遺傳育種手段選育大豆Lox缺失體材料，以降低或消除Lox活性的影響具有重要意義。王若蘭等（2008）研究認為，大豆Lox缺失體樣品在儲藏期間的品質變化比正常品種緩慢，Lox缺失可在一定程度上提高大豆儲藏品質的穩定性。王金龍等（2000）研究認為，大豆Lox缺失對蛋白質、脂肪及脂肪酸含量沒有影響，但可能引起種子中脯氨酸含量降低,?而對其它氨基酸無影響。脯氨酸不屬于人體必需氨基酸，故Lox缺失不會引起大豆營養品質降低。Julian等（2010）采用探針技術分別鑒定Lox2和Lox3，但該技術存在技術復雜、費用較高等問題。通過分子標記技術篩選大豆Lox缺失體，可以加快無腥大豆品種選育進程，進而從根本上改善大豆產品豆腥味，提高大豆的儲藏品質。對目前已有的LOX缺失體中LOX基因進行測序分析，表明Lox1缺失體在其編碼基因的第8個外顯子內缺失1個74bp的片段，導致Lox1蛋白翻譯過早終止；Lox3缺失體在其編碼基因的第1個外顯子內缺失1個單核苷酸“G”，從而導致移碼突變。?Yarmilla等（2011）只針對一個RIL群體開發分子標記，分別鑒定大豆Lox?1、Lox2和Lox3。目前已有的方法都只能對三種Lox缺失體單獨進行鑒定，檢測效率較低。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種鑒定大豆Lox1和Lox3缺失體的多重PCR引物及其方法。

本發明是通過以下技術方案來實現的。

一種鑒定大豆Lox1和Lox3缺失體的多重PCR引物，包括以下兩組引物對：

Lox1F：ATCTTAGCGTGCTTCACCCA；

Lox?1R：CATCAGCGGCATAAGGATAG；

Lox3F：TAACCAGCGTTGGGGGAA?；

Lox3R：CATTTATAGACGTGCGTGCA。

一種鑒定大豆Lox1和Lox3缺失體的方法，包括以下步驟：

（1）以待測缺失體的大豆基因為DNA模板，將上述兩組引物對上述DNA模板進行PCR擴增；

（2）若述PCR擴增產物中有424bp條帶，則上述待測大豆基因含有Lox1，若有350bp條帶，則上述待測大豆基因缺失Lox1；若述PCR擴增產物中有474bp條帶，則上述待測大豆基因含有Lox3，若無474bp條帶，則上述待測大豆基因缺失Lox3。

進一步地，上述Lox1缺失體的大豆為五星4號、鑒31中的任意一種。

進一步地，上述Lox3缺失體的大豆為五星1號、五星4號、鑒31中的任意一種。

本發明的有益效果：

本發明提供的特異性引物及其鑒定技術，不但節約時間和費用，而且鑒定結果準確可靠，可顯著提高同時對Lox1和Lox3缺失體材料的篩選效率。

附圖說明

圖1為實施案例1瓊脂糖凝膠電泳的示意圖。

具體實施方式

下面根據附圖和實施例對本發明作進一步詳細說明。

在下述的實施案例1中，一共選取七種大豆品種進行鑒定，這七種大豆品種均由河北省農林科學院提供的常用品種。

1、五星1號

審定編號:?冀審豆2001002號?

品種來源:?河北省農林科學院糧油作物研究所1997年育成，親本組合為冀豆9/Century。

2、五星2號

審定編號：國審豆2004005

選育單位：河北省農林科學院糧油作物研究所

品種來源：冀豆9號×Century

3、五星3號