[發明專利]成人多能祖細胞的培養基以及采用成人多能祖細胞的培養基培養成人多能祖細胞的方法

無效

• 申請號: 201310054058.X
• 申請日: 2013-02-20
• 公開（公告）號: CN103409366A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 范時洋
• 申請（專利權）人: 潘駿
• 主分類號: C12N5/074
• 分類號: C12N5/074
• 代理公司: 杭州斯可睿專利事務所有限公司 33241
• 代理人: 鄭書利

1.一種成人多能祖細胞的培養基，其特征是：包括560ml低糖DMEM、400mlMCDB-201、20ml胎牛血清、20ml雙抗青霉素和鏈霉素、10ug胰島素-轉鐵蛋白-硒（1×）、0.039mg地塞米松、25.6mg?2-磷酸抗壞血酸、1ug重組人表皮生長因子、1ug重組人血小板衍化生長因子BB?和1ug白血病抑制因子。

2.一種采用權利要求1所述成人多能祖細胞的培養基培養成人多能祖細胞的方法，其特征是：包括采用權利要求1所述的成人多能祖細胞的培養基，500/cm²低密度貼壁培養，并用CD45、GlyA免疫微磁珠分選去除CD45、GlyA陽性雜質細胞純化MAPC。

3.根據權利要求2所述的培養成人多能祖細胞的方法，其特征是：具體步驟包括A、臨床常規抽取骨髓5ml，采用低分子肝素鈉0.5ml抗凝；B、加入10ml淋巴細胞分離液中，以2500r/min密度梯度離心，收集中間灰色單核細胞層；C、加入預先放好5ml培養基的25?cm²培養瓶中，37℃，5%CO₂，孵箱中進行骨髓單核細胞培養；D、培養2?天后換液，吸管吸除原培養基及懸浮細胞，然后PBS洗滌，加入新培養基5ml，繼續37℃，5%CO₂，孵箱中培養；E、以后每2～3天換液1次，直至30日內倒置顯微鏡下觀察細胞長至70%融合時，進行傳代培養；F、待細胞數量增至10⁷時，進行CD45、GlyA免疫微磁珠分選去除CD45、GlyA陽性雜質細胞純化MAPC。