[發明專利]一種快速提取荷花花瓣總RNA的方法

無效

• 申請號: 201310053848.6
• 申請日: 2013-02-20
• 公開（公告）號: CN103993003A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 王坤;鄧嬌;楊平仿
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 黃瑞棠

1.一種快速提取荷花花瓣總RNA的方法，其特征在于包括下列步驟：

①稱取0.2g荷花花瓣于液氮預冷的研缽中迅速充分地研磨成粉末狀；

②將粉末狀樣品轉入-1.5mL?RNase?free的離心管中，加入1mL?65^oC預熱的細胞裂解液，混勻后繼續65^oC溫育10min，期間搖勻2～3次；?

③加入300μL的乙酸鉀溶液，上下溫和顛倒混勻15～20次，室溫靜置3～5min；

④4^oC，12000rpm，離心5min，取上清于一新的離心管中；

⑤加入300μL氯仿：異戊醇=24：1，震蕩15s，4^oC，12000rpm，離心30s使分層，取上層水相于一新的離心管中，重復此步驟1～2次；

⑥加入與上層水相等體積的-20^oC預冷的異丙醇，置于-20^oC冰箱30min；

⑦在4^oC、12000rpm的條件下，離心5min使RNA沉淀；

⑧移去上清，用1mL的-20^?oC預冷的75%乙醇洗滌沉淀兩次，在超凈工作臺內吹干后，加入10～20μL的焦炭酸二乙酯處理水溶解RNA，于-80^?oC保存；

????所述的1升細胞裂解液中含有下列組分：

十二烷基硫酸鈉????????????????????????40克

三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽????????????????200毫摩爾

乙二胺四乙酸　　　　　　　　　　　　　0.5毫摩爾

聚乙烯吡咯烷酮　　　　　　　　　　　　20克

β-巰基乙醇　　　　　　　　　　　　　?10毫升

其它為焦炭酸二乙酯處理水。