[發明專利]一種大豆抗花葉病毒主效基因位點及應用

有效

• 申請號: 201310053813.2
• 申請日: 2013-02-20
• 公開（公告）號: CN103114145A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發明（設計）人: 陳海峰;沙愛華;單志慧;楊中路;張曉娟;張嬋娟;陳李淼;陳水蓮;邱德珍;周蓉;吳學軍;周新安
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明屬于大豆分子生物學及遺傳育種技術領域。更具體涉及一種大豆抗花葉病毒主效基因位點及與該主效基因位點緊密連鎖的分子標記，同時還涉及該分子標記在大豆抗花葉病毒育種中的應用。

背景技術

大豆是一種重要農作物，富含蛋白質和脂肪以及對人體有利的活性成分如皂貳、異黃酮、磷脂等，是世界上植物性蛋白和油分的主要來源之一。目前我國大豆種植面積、總產及單產均居世界第四位，生產水平落后于世界大豆生產。2012年中國大豆種植面積718萬公頃，總產量1280萬噸，而進口大豆達到創記錄的5750萬噸，占據我國五分之四的大豆市場。造成我國大豆生產滯后、供給嚴重不足、國內大豆產業遭受進口轉基因大豆嚴重沖擊的原因是多方面的，但主要原因之一是綜合抗病蟲害和抗逆能力差，單產低，種植效益低下，國際競爭力弱。

大豆花葉病毒(Soybean?mosaic?virus?SMV)病是世界上分布最廣泛，危害大豆最嚴重的病毒性病害之一，在我國各產區均有發生，己經成為我國東北、黃淮和長江流域大豆主產區最主要的病害之一。SMV侵染大豆后，會導致大豆葉片中葉綠素含量及葉質下降，葉面積減小，影響光合面積和光合能力，植株矮小，生長量下降，單株莢數減少，降低種子百粒重、萌發率、蛋白質含量及含油量，并影響脂肪酸、蛋白質、微量元素及游離氨基酸的組分等，嚴重影響大豆產量和品質。大豆被花葉病毒侵染后的產量損失一般在15%－35%，發病嚴重的年份，引起的產量損失可達70%以上，甚至絕產。大豆品種感染SMV后，根、莖、葉等形態器官受到嚴重影響，影響程度從大到小依次為單株粒重、單株葉面積、根瘤重、莖葉干重、根干重、種子褐斑粒率、株高、百粒重，且早期感染SMV其危害大于中后期感染。大豆花葉病毒病不但影響大豆的產量，還影響大豆的品質，嚴重時病粒率達50%以上，嚴重降低大豆的商品質量。

作物的許多重要農藝性狀如產量、品質和抗性等都是數量性狀，由多個基因控制，表現為連續變異，且易受環境影響，相對于由單基因控制的質量性狀而言，選擇效果不好。通過構建遺傳圖譜，定位數量性狀位點（quantitative?trait?loci，QTL），利用與QTL緊密連鎖的分子標記在早代對育種材料進行選擇，可克服環境影響，節約生產成本，提高選擇效率，加快育進程。對大豆抗SMV的QTL定位研究也有一些報道，目前，在大豆第2、13和14號染色體上已定位抗大豆花葉病毒QTL，但效應值較小，較難在大豆育種中應用。

發明內容

本發明所要解決的一個技術問題是提供鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒（SC-3株系）性狀的方法。

本發明所提供的一種鑒定或輔助鑒定大豆抗花葉病毒性狀的方法，包括如下步驟：分別以待鑒定大豆的基因組DNA為模板，用由SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示的兩條單鏈DNA組成的PCR引物對進行PCR擴增，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測所得到的PCR產物，按照下述方法確定所述待鑒定大豆的抗花葉病毒性狀：

如果待鑒定大豆的PCR擴增產物在聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示為與中豆32的PCR擴增產物大小相同的一個條帶，所述待鑒定大豆為抗花葉病毒大豆或為候選抗花葉病毒大豆，如果所述PCR擴增產物在聚丙烯酰胺凝膠電泳中顯示為與中豆29的PCR擴增產物大小相同的一個條帶，所述待鑒定大豆為非抗花葉病毒大豆或為候選非抗花葉病毒大豆；所述待鑒定大豆選自中豆29×中豆32的雜種后代中的F₇及其以后世代的家系。

其中，所述聚丙烯酰胺凝膠電泳中，所述聚丙烯酰胺凝膠的濃度（凝膠溶液中單體丙烯酰胺和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺的總質量濃度）可為60g/L，所述聚丙烯酰胺凝膠的交聯度（凝膠溶液中甲叉雙丙烯酰胺占丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺的質量分數）可為5%。

上述方法中，所述PCR擴增中先進行10個第一個循環后再進行25個第二個循環，所述第一個循環的引物退火條件為60℃?30s，所述第二個循環的引物退火條件為55℃?30s。

其中，所述第一個循環的溫度程序是：先94℃?30s，然后60℃?30s，最后72℃?1min；所述第二個循環的溫度程序是：先94℃?30s，然后55℃?30s，最后72℃?1min。

上述方法中，所述待鑒定大豆具體選自中豆29×中豆32的雜種后代中的F₇至F₁₁家系。在本發明的一個實施例中，所述待鑒定大豆具體選自中豆29×中豆32的雜種后代中的F₁₁的家系。