[發明專利]一種黃曲霉毒素B1的檢測方法有效
| 申請號： | 201310053018.3 | 申請日： | 2013-02-19 |
| 公開（公告）號： | CN103175874A | 公開（公告）日： | 2013-06-26 |
| 發明（設計）人： | 賈能勤;于利利;張洋;吳慧;楊亞云;黃楚森 | 申請（專利權）人： | 上海師范大學 |
| 主分類號： | G01N27/26 | 分類號： | G01N27/26 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227 | 代理人： | 吳瑾瑜 |
| 地址： | 200234 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 黃曲霉 毒素 sub 檢測 方法 | ||
1.一種黃曲霉毒素B1的檢測方法，其步驟包括：
（1）繪制標準曲線：將黃曲霉毒素B1樣品與有機溶劑共孵育，配置成不同濃度的黃曲霉毒素B1標準品，在標準品中分別加入阻抗溶液；用多壁碳納米管/離子液體/抗體修飾電極測得阻抗溶液中不同的黃曲霉毒素B1濃度的相應的阻抗值，再以阻抗差值為縱坐標，黃曲霉毒素B1標準樣濃度為橫坐標，繪制標準曲線；
（2）將待測樣品提純后與有機溶劑共孵育，配成待測樣品溶液，然后再加入阻抗溶液，用預處理過的多壁碳納米管/離子液體/抗體修飾電極測得阻抗溶液的阻抗值，再根據步驟（1）中所得的標準曲線，計算待測樣品中黃曲霉毒素B1的濃度。
2.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素B1的檢測方法，其特征在于：所述步驟（1）和步驟（2）中的阻抗溶液為磷酸鹽緩沖溶液，該溶液的pH值為6.8-8.0，濃度為0.5-1.5mmol/L；所述磷酸鹽緩沖溶液中還含有濃度為0.5-1.5mmol/L的K4Fe(CN)6或K3Fe(CN)6和0.05-0.15mol/L的KCl。
3.根據權利要求2所述的黃曲霉毒素B1的檢測方法，其特征在于：所述步驟（1）中，將不同濃度的已知黃曲霉毒素B1樣品溶液分別與有機溶劑在35℃-40℃條件下共孵育20-30分鐘，其中，黃曲霉毒素B1與有機溶劑的加入配比為：1-10ng：1mL。
4.根據權利要求2所述的黃曲霉毒素B1的檢測方法，其特征在于：所述步驟（2）中，將提純后的待測樣品溶液與有機溶劑在35℃-40℃條件下共孵育20-30分鐘，其中，待測樣品與有機溶劑的加入配比為2-6μg：1mL。
5.根據權利要求1、3或4所述的黃曲霉毒素B1的檢測方法，其特征在于：所述有機溶劑為甲醇、三氯甲烷或丙酮。
6.根據權利要求2所述的黃曲霉毒素B1的檢測方法，其特征在于：所述步驟（1）中，標準品與阻抗溶液的體積比為1:5-20；所述步驟（2）中，待測樣品溶液與阻抗溶液的體積比為1:5-20。
7.根據權利要求2所述的黃曲霉毒素B1的檢測方法，其特征在于：所述步驟（2）中，待測樣品的提純方法為，將待測樣品用石油醚清洗，加入甲醇水溶液靜置分層，取下層混合液加入硫酸鈉溶液稀釋，再加入三氯甲烷靜置，將下層混合液脫水處理。
8.根據權利要求7所述的黃曲霉毒素B1的檢測方法，其特征在于：所述待測樣品、甲醇、硫酸鈉、三氯甲烷的加入配比為10g：40-45mL：1-2g：8-12mL。
9.根據權利要求1所述的黃曲霉毒素B1的檢測方法，其特征在于：所述步驟（1）和步驟（2）中的多壁碳納米管/離子液體/抗體修飾電極的制備方法為，
（a）將長度為100-300nm的多壁碳納米管和1-丁基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽混合，再加入黃曲霉毒素B1單克隆抗體搖床反應，制得離子液體包裹的多壁碳納米管混合液；
（b）將步驟（a）中制得的混合液滴加到經過預處理的玻碳電極表面，用磷酸鹽緩沖溶液沖洗后備用。
10.根據權利要求9所述的黃曲霉毒素B1的檢測方法，其特征在于：所述步驟（a）中，多壁碳納米管、1-丁基-3-甲基-咪唑六氟磷酸鹽和黃曲霉毒素B1單克隆抗體的加入配比為：1.2-2.4mg：1mL：0.6-1μg。
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