[發明專利]一種黃曲霉毒素B1的檢測方法

有效

• 申請號: 201310053018.3
• 申請日: 2013-02-19
• 公開（公告）號: CN103175874A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 賈能勤;于利利;張洋;吳慧;楊亞云;黃楚森
• 申請（專利權）人: 上海師范大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

技術領域

本發明屬于電化學檢測領域，特別涉及一種黃曲霉毒素B₁的檢測方法。

背景技術

黃曲霉毒素主要是由黃曲霉菌和寄生曲霉菌等多種真菌產生的毒性代謝產物，其結構中含有一個雙呋喃環和一個氧雜萘鄰酮。黃曲霉毒素是迄今發現的毒性最強的一類生物毒素，具有很強的毒性、致癌性、致突變性和致畸性。目前已分離的黃曲霉毒素及其衍生物已有20多種，其中黃曲霉毒素B₁（AFB₁）的毒性、致癌性、污染率最大，并且是各種真菌毒素中其化學性質最穩定的一種，一般的食品加工手段對其產生的破壞性極小，廣泛存在于糧食谷物和加工食品中，對人類健康危害性極大。大量研究資料表明:糧食、食用油（花生油、菜籽油、大豆油、玉米油）、特種油,如橄欖油、山茶油等油料作物的種子和加工品、水果、干果、蔬菜、調味品、煙草和草藥、乳制品和發酵類產品中都發現了黃曲霉毒素B₁的存在。

各國都規定了各種真菌毒素的限量標準并加強監管力度。歐盟規定在玉米、花生、堅果和谷物等食品中黃曲霉毒素總量不能超過4ppb，其中黃曲霉毒素B₁不能超過2ppb；我國食品中黃曲霉毒素B₁允許量植物油（除玉米、花生油）中不得超過10μg/kg，其他糧食、豆類、發酵食品及嬰幼兒配方食品中不得超過5μg/kg。盡管世界各國對食品中黃曲霉毒素限量標準不盡相同，但都趨于更低的控制線。目前檢測黃曲霉毒素的常用技術為HPLC，ELISA，TLC等，但這些檢測技術都在不同程度上存在著樣品前處理復雜、儀器設備昂貴、耗時較長、操作流程復雜等不足。而電化學交流阻抗技術作為一種快速靈敏的電化學檢測方法因其能實現很寬頻率范圍內的阻抗譜來研究電極系統,并且作為一種無損傷、原位電極過程的電化學測試技術，普遍應用于電極界面特性的研究。碳納米管因有很好的導電性、高的比表面積和熱力學穩定性等特點，應用廣泛；離子液體是完全由陰離子與陽離子組成的液體，在室溫或室溫附近溫度下呈液態的由離子構成的物質。

發明內容

本發明的目的是提供一種黃曲霉毒素B₁（AFB₁）的檢測方法，該方法選擇性好、響應速度快、靈敏度高、檢測范圍寬。

發明的目的可以通過以下方案來實現：

一種黃曲霉毒素B₁的檢測方法，其步驟包括：

（1）繪制標準曲線：將黃曲霉毒素B1樣品與有機溶劑共孵育，配置成不同濃度的黃曲霉毒素B₁標準品，在標準品中分別加入阻抗溶液；用多壁碳納米管/離子液體/抗體修飾電極測得阻抗溶液中不同黃曲霉毒素B₁濃度的相應的阻抗值，再以阻抗差值為縱坐標，黃曲霉毒素B₁標準樣濃度為橫坐標，繪制標準曲線；

（2）將待測樣品提純后與有機溶劑共孵育，配成待測樣品溶液，然后再加入阻抗溶液，用預處理過的多壁碳納米管/離子液體/抗體修飾電極測得溶液中的阻抗值，再根據步驟（1）中所得的標準曲線，計算待測樣品中黃曲霉毒素B₁的濃度。

校準曲線上通過線性方程式為Ret=1651.9C+600.56

式中：Ret--阻抗差值（ohm）

C--黃曲霉毒素濃度（ng/ml）

所述步驟（1）和步驟（2）中的阻抗溶液為磷酸鹽緩沖溶液，該溶液的pH值為6.8-8.0，濃度為0.5-1.5mmol/L；所述磷酸鹽緩沖溶液中還含有濃度為0.5-1.5mmol/L的K₄Fe(CN)₆或K₃Fe(CN)₆和0.05-0.15mol/L的KCl。優選的，所述磷酸鹽緩沖溶液的pH值為7.0-7.8，濃度為0.8-1.2mmol/L，所述磷酸鹽緩沖溶液中還含有濃度為0.8-1.2mmol/L的K₄Fe(CN)₆或K₃Fe(CN)₆和0.08-1.12mol/L的KCl。更優選的，所述磷酸鹽緩沖溶液的pH值為7.4，濃度為1mmol/L，所述磷酸鹽緩沖溶液中還含有濃度為1mmol/L的K₄Fe(CN)₆或K₃Fe(CN)₆和0.1mol/L的KCl。