[發明專利]從胎盤和臍帶中同時提取和純化多種來源干細胞的方法

無效

• 申請號: 201310050738.4
• 申請日: 2013-02-08
• 公開（公告）號: CN103320382A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 周勝利;胡當玉;周凝;徐統樂;胡曉辰
• 申請（專利權）人: 周勝利
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735;C12N5/0775;C12N5/0789
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種從胎盤和臍帶中同時提取和純化多種來源干細胞的方法，其特征在于，所述方法包括使用采血器材收集臍帶血，然后以機械的方式收集胎盤血，最后采用機械、酶消化和單克隆抗體-磁珠法從胎膜及胎盤組織中提取的干細胞的方法，具體包括如下步驟：

首先從健康產婦的一個胎盤和臍帶中同時提取和儲存多種來源的干細胞，所述干細胞包括臍帶血造血干細胞、胎盤血造血干細胞、羊水、胎盤羊膜及絨毛膜上皮干細胞和來自于胎盤組織的間充質干細胞；其中，每個胎盤的臍帶血可以提取平均為1.50X10⁹細胞、胎盤血平均可提取3.8X10⁹個細胞、羊水中可以提取平均為3.0X10⁸、胎盤羊膜以及絨毛膜上皮干細胞2.0X10⁸胎盤組織間充質干細胞為3.5X10⁹有核細胞、細胞活性為95％以上，多種來源的造血干細胞其CD34陽性標記細胞總數為2.5X10⁸，微生物污染率低于5％以下；

將上述來源的干細胞建立聯合干細胞庫；

將聯合干細胞庫備案并組織配型(HLA)以符合臨床的要求；

所述干細胞還可以是從臍帶靜脈注入抗凝劑、抗生素，以輸液泵連續循環的方式從臍帶動脈處收集的胎盤血造血干細胞；

所述干細胞還可以是將羊水和剝離胎膜或胎盤以擠壓、剪碎、研磨或離心的機械方式或酶消化的方法收集且被清洗的組織間充質干細胞，再用單克隆抗體磁珠法純化該間充質干細胞，之后將純化后的間充質干細胞在體外培養成如皮膚、粘膜、神經、腎、肝、胰島定向的組織細胞；將上述干細胞臨床分別做各種檢測，濃縮，純化存放于保持無菌以及控制溫度在0℃到4℃之間的收集箱內；將備用干細胞儲存在深低溫狀態。

2.根據權利要求1所述的從胎盤和臍帶中同時提取和純化多種來源干細胞的方法，其特征在于，所述多種來源的干細胞，僅需要做一次性的檢測，即微生物、血型和組織配型(HLA)這種一次性檢測的結果適合于多種細胞的臨床應用；

其中的臍帶血干細胞可供給需移植的兒童；

其中的臍帶血和胎盤血干細胞可以供給體重較大的病人；

其中的胎盤間充質干細胞可以應用于細胞治療；

其中的上皮干細胞可用于組織工程的種子干細胞或一次性地多種細胞聯合供給成年人的造血干細胞移植；也可用于美容及需做皮膚移植等疾病的細胞治療。

3.根據權利要求1所述的從胎盤和臍帶中同時提取和純化多種來源干細胞的方法，其特征在于，所述多種來源的干細胞，其中的臍帶血干細胞以臨床上常為30公斤以下的病人提供造血干細胞移植；

其中的臍帶血干細胞和胎盤血干細胞的聯合應用以臨床上常為30公斤以上的病人提供造血干細胞移植；

其中的一次性的多種細胞聯合應用以體重大于60公斤以上病人的造血干細胞移植。

4.根據權利要求1所述的從胎盤和臍帶中同時提取和純化多種來源干細胞的方法，其特征在于，所述的來自于胎盤組織的間充質和上皮干細胞可以用于基因轉染、基因治療及細胞組織工程應用和研究。

5.根據權利要求1所述的從胎盤和臍帶中同時提取和純化多種來源干細胞的方法，其特征在于，所述的來自于胎盤組織的間充質干細胞可以應用于干細胞移植也可單獨用于細胞治療，還可以制備成針劑，用于幫助和促進干細胞再生并預防移植物排宿主病(GVHD)。

6.根據權利要求1所述的從胎盤和臍帶中同時提取和純化多種來源干細胞的方法，其特征在于，所述的來自羊水，胎盤組織的間充質和造血干/祖細胞可以在體外培養后應用于病人。

7.根據權利要求1所述的從胎盤和臍帶中同時提取和純化多種來源干細胞的方法，其特征在于，從健康產婦的一個胎盤和臍帶中同時提取多種來源的干細胞，即臍帶血造血干細胞、胎盤血造血干細胞、羊水和來自于胎膜上皮干細胞和胎盤的間充質干細胞，用以建立異體干細胞庫，并提供這多種來源的干細胞供異體干細胞移植和細胞治療。

8.根據權利要求1所述的從胎盤和臍帶中同時提取和純化多種來源干細胞的方法，其特征在于，所述的從健康產婦的一個胎盤和臍帶中同時提取多種來源的干細胞，即臍帶血干細胞、胎盤造血干細胞、羊水和來自于胎膜和上皮干細胞和胎盤組織的間充質干細胞，用以建立自體干細胞庫，并為新生兒保存這多種來源的干細胞，提供新生兒或其有關親屬未來應有的自體干細胞保存。