[發明專利]同時鑒別Q型和B型煙粉虱的特異性PCR方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201310049776.8
• 申請日: 2013-02-07
• 公開（公告）號: CN103088147A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 王少麗;王金娜;張友軍;吳青君;謝文;徐寶云
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

技術領域

本發明屬于生物檢測技術，特別是一種同時鑒別Q型和B型煙粉虱的特異性PCR方法及試劑盒。

背景技術

煙粉虱Bemisia?taabaci屬半翅目，粉虱科，廣泛分布于世界各大洲，通過直接取食植物汁液、分泌蜜露污染植物以及傳播植物病毒對農業和園藝生產造成嚴重危害。煙粉虱入侵性極強，過去二十多年來，煙粉虱入侵到全球多個國家和地區并取代了當地多個土著煙粉虱，對世界各地多種重要作物造成了嚴重危害，除了本身刺吸植物汁液引起葉片甚至植株萎蔫、寄主植物生理紊亂外，最重要的是煙粉虱傳播的雙生病毒病－番茄黃曲葉病毒病大面積暴發為害（Brown&Czosnek,2002；Czosnek&Ghanim,2011），并由南方蔓延到北方（張穗等，2006；吳永漢等，2007；周瑩等，2010）。病毒病的流行給番茄生產帶來了巨大威脅，局部地區的番茄大棚甚至絕收。因而，煙粉虱成為全球密切關注的“超級害蟲”(Liu?et?al.，2007;Martinez-Carrillo?and?Brown,2007;Bethke?et?al.，2009)。煙粉虱是一個包括許多遺傳型的復合種，被命名的生物型至少有24個（Dinsdale?et?al.，2010），截止到2011年，已經報道的亞種至少有32個，目前我國至少存在6種生物型(B，Q，ZHJ-1，ZHJ-2，ZHJ-3，FJ-l)(萬方浩等，2009)，這其中分布最為廣泛、危害最為嚴重的生物型為近年來入侵我國并逐步形成蔓延擴散趨勢的B型和Q型煙粉虱。根據最近發表的系統發育分析文獻，雜交試驗和交配行為觀察結果表明煙粉虱至少包括28個遺傳結構差別明顯、但外部形態無法區分的隱種（Dinsdale?et?al.,2010;Xu?et?al.,2010;De?Barro?et?al.,2011;Hu?et?al.,2011）。然而，形態學上尚缺乏的有力證據以及遺傳學角度的分類方法是否合理，使得隱種的命名法則在分類學上無充足的依據，所以本申請中依然沿用生物型的概念。在所有煙粉虱的生物型中，B型和Q型煙粉虱當屬入侵性強、在全世界范圍內廣泛分布、危害性最嚴重。

B型煙粉虱起源于中東-小亞細亞地區（De?Barro?et?al.,2011），90年代中后期，B型煙粉虱入侵中國，并給農業和園藝生產帶來了經濟損失。2005年在中國云南首次發現了Q型煙粉虱（禇棟等，2005），在隨后的幾年內，發現Q型煙粉虱逐漸取代了B型煙粉虱，2009年底我國已經至少有21個省市發現了Q型煙粉取代了原來為害的B型煙粉虱（Pan?et?al.,2011）;但在一些地區，田間發現二者是混合發生的（褚棟等，2007；褚棟等，2009）。

B型煙粉虱和Q型煙粉虱表觀一致，在形態上無法區分，但二者在生物學特性、寄主植物、生理和分子水平上存在明顯差異，例如Q型煙粉虱比B型煙粉虱具有更強的寄主適應性和抗藥性（Muniz,2000;Horowitz?et?al.,2003），對病毒病的傳播能力更強（pan?et?al.,2012）等，而且許多遺傳型之間存在生殖隔離。目前經常用于區分其生物型的分子鑒定方法就是采用mtCOI特異性引物進行特異性PCR擴增，然后將PCR擴增產物進行測序和序列比對，進而來確定是何種生物型（羅晨等，2002）。但是這種方法需要經過PCR擴增、克隆、測序、序列比對等諸多步驟，耗時較長，而且需要大量的資金作為支持。