[發(fā)明專利]同時鑒別Q型和B型煙粉虱的特異性PCR方法及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310049776.8
• 申請日: 2013-02-07
• 公開（公告）號: CN103088147A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王少麗;王金娜;張友軍;吳青君;謝文;徐寶云
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129
• 代理人: 張濤

1.用于檢測B型煙粉虱和Q型煙粉虱的方法，包括對待測煙粉虱的DNA進行PCR擴增和檢測PCR擴增產(chǎn)物，其特征在于：?

所述PCR擴增所采用的引物對如下：?

上游引物Bt-F：5’-TCT?CAT?CGG?TGT?CTT?ATT?G-3’，?

下游引物Bt-R：5’-CTT?CGG?GTC?GTT?TCT?CGT-3’；?

所述檢測PCR擴增產(chǎn)物指對PCR擴增產(chǎn)物進行凝膠電泳并觀察是否出現(xiàn)特征帶型，Q型煙粉虱的特征帶型為一條507bp條帶；B型煙粉虱特征帶型為507bp和660bp兩條帶。?

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述PCR擴增的體系：Taq?DNA聚合酶0.05U/μl、1×Taq緩沖液、氯化鎂1.5mM、dNTPs?200μM、上游引物和下游引物的濃度分別為0.5μM、DNA模板濃度為0.17×10^-5~0.2ng/ul，加ddH₂O至20μl。?

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，所述PCR擴增的程序為：94℃預(yù)變性3分鐘；然后進行30個循環(huán)：94℃變性1分鐘、59℃退火45秒、72℃延伸110秒；最后72℃延伸10min。?

4.用于檢測B型煙粉虱和Q型煙粉虱的試劑盒，其特征在于包括一對PCR引物：?

上游引物Bt-F：5’-TCT?CAT?CGG?TGT?CTT?ATT?G-3’，?

下游引物Bt-R：5’-CTT?CGG?GTC?GTT?TCT?CGT-3’。?

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，還包括用于PCR檢測的試劑：Taq?DNA聚合酶，dNTPs，氯化鎂，Taq?DNA聚合酶緩沖液和無菌水。?

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，所述PCR引物預(yù)混于PCR預(yù)混體系中，所述PCR預(yù)混體系如下：Taq?DNA聚合酶0.05U/μl、1×Taq緩沖液、1.5mM氯化鎂、200μM?dNTPs、上游引物和下游引物分別0.5μM和無菌水。?