[發明專利]同時鑒別Q型和B型煙粉虱的特異性PCR方法及試劑盒有效
| 申請號： | 201310049776.8 | 申請日： | 2013-02-07 |
| 公開（公告）號： | CN103088147A | 公開（公告）日： | 2013-05-08 |
| 發明（設計）人： | 王少麗;王金娜;張友軍;吳青君;謝文;徐寶云 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蔬菜花卉研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129 | 代理人： | 張濤 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 同時 鑒別 型煙粉虱 特異性 pcr 方法 試劑盒 | ||
1.用于檢測B型煙粉虱和Q型煙粉虱的方法，包括對待測煙粉虱的DNA進行PCR擴增和檢測PCR擴增產物，其特征在于：?
所述PCR擴增所采用的引物對如下：?
上游引物Bt-F：5’-TCT?CAT?CGG?TGT?CTT?ATT?G-3’，?
下游引物Bt-R：5’-CTT?CGG?GTC?GTT?TCT?CGT-3’；?
所述檢測PCR擴增產物指對PCR擴增產物進行凝膠電泳并觀察是否出現特征帶型，Q型煙粉虱的特征帶型為一條507bp條帶；B型煙粉虱特征帶型為507bp和660bp兩條帶。?
2.根據權利要求1所述的方法，所述PCR擴增的體系：Taq?DNA聚合酶0.05U/μl、1×Taq緩沖液、氯化鎂1.5mM、dNTPs?200μM、上游引物和下游引物的濃度分別為0.5μM、DNA模板濃度為0.17×10-5~0.2ng/ul，加ddH2O至20μl。?
3.根據權利要求1或2所述的方法，所述PCR擴增的程序為：94℃預變性3分鐘；然后進行30個循環：94℃變性1分鐘、59℃退火45秒、72℃延伸110秒；最后72℃延伸10min。?
4.用于檢測B型煙粉虱和Q型煙粉虱的試劑盒，其特征在于包括一對PCR引物：?
上游引物Bt-F：5’-TCT?CAT?CGG?TGT?CTT?ATT?G-3’，?
下游引物Bt-R：5’-CTT?CGG?GTC?GTT?TCT?CGT-3’。?
5.根據權利要求4所述的試劑盒，還包括用于PCR檢測的試劑：Taq?DNA聚合酶，dNTPs，氯化鎂，Taq?DNA聚合酶緩沖液和無菌水。?
6.根據權利要求4所述的試劑盒，所述PCR引物預混于PCR預混體系中，所述PCR預混體系如下：Taq?DNA聚合酶0.05U/μl、1×Taq緩沖液、1.5mM氯化鎂、200μM?dNTPs、上游引物和下游引物分別0.5μM和無菌水。?
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