[發(fā)明專利]一種以超順磁納米顆粒為固相進行多肽合成及同步構(gòu)建多肽磁納米探針的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310049011.4
• 申請日: 2013-02-06
• 公開（公告）號: CN103965285A
• 公開（公告）日: 2014-08-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沙印林;羅聃
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大學(xué)
• 主分類號: C07K1/06
• 分類號: C07K1/06;C07K1/04;C12N5/09;C12N13/00;A61K49/14;G01N21/00
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

1.一種以超順磁納米顆粒為固相進行多肽合成及同步構(gòu)建多肽磁納米探針的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）制備二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒，表面暴露氨基；

（2）二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒，通過HBTU/HOBt/DIEA的偶聯(lián)策略在其表面偶聯(lián)rink amide linker；

（3）分別以二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒和偶聯(lián)rink amide linker的二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒為固相，利用HBTU/HOBt/DIEA的偶聯(lián)策略以Fmoc保護的氨基酸為單體，同步逐個接上氨基酸，進行多肽合成；

（4）分別向兩組固相中加入K試劑，所述的K試劑由三氟醋酸，苯甲硫醚，1,2-二巰基乙烷，苯酚以及水配制而成，優(yōu)選的三氟醋酸，苯甲硫醚，1,2-二巰基乙烷，苯酚以及水的體積比為82.5：5：2.5：5：5；K試劑針對兩種不同的固相起不同的作用：

a對于偶聯(lián)rink amide linker的二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒的固相，用于將合成的多肽脫側(cè)鏈保護并從該固相上切下；

b對于二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒的固相，用于將合成多肽脫側(cè)鏈保護但不將多肽切下，得到綴合多肽的磁納米探針；

（5）將上述步驟（4）a中從偶聯(lián)rink amide linker的二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒固相上切下的多肽以乙醚沉降，收集產(chǎn)品并用MALDI-TOF-MS驗證合成多肽的化學(xué)結(jié)構(gòu)；

（6）將上述步驟（4）b中由二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒固相得到的綴合多肽的磁納米探針溶于PBS中，通過體外和體內(nèi)實驗印證合成肽是否具有生物學(xué)功能。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的超順磁納米顆粒為下列三種中任意一種：超順磁Fe₃O₄納米顆粒，超順磁Fe₂O₃納米顆粒，超順磁FePt納米顆粒。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于作為固相的二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒和偶聯(lián)rink amide linker的二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒是通過以下步驟制備得到的：

二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒固相的制備：

1）配置100ml濃度為0.05mg/ml的超順磁納米顆粒的氯仿溶液A；

2）將溶液A置于40°C下，以150rpm的轉(zhuǎn)速減壓蒸餾將溶液濃縮至10微升；

3）向濃縮后的溶液A中加入100ml15mM的十二烷基磺酸鈉水溶液，在40°C水浴中以60W的超聲功率超聲10min得溶液B；

4）將溶液B置于搖床，加入50微升正辛基三甲氧基硅烷（OCTMO），搖勻30分鐘后；繼續(xù)滴加50微升3-氨基丙基三乙氧基硅烷（APS），繼續(xù)反應(yīng)48小時；反應(yīng)結(jié)束后，將溶液放置于磁鐵上，放置10小時后棄去溶液；收集沉淀用水洗三遍，得到二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒；

偶聯(lián)rink amide linker的二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒固相的制備：

1）配置100ml濃度為0.05mg/ml的超順磁納米顆粒的氯仿溶液A；

2）將溶液A置于40°C下，以150rpm的轉(zhuǎn)速減壓蒸餾將溶液濃縮至10微升；

3）向濃縮后的溶液A中加入100ml15mM的十二烷基磺酸鈉水溶液，在40°C水浴中以60W的超聲功率超聲10min得溶液B；

4）將溶液B置于搖床，加入50微升正辛基三甲氧基硅烷（OCTMO），搖勻30分鐘后；繼續(xù)滴加50微升3-氨基丙基三乙氧基硅烷（APS），繼續(xù)反應(yīng)48小時；反應(yīng)結(jié)束后，將溶液放置于磁鐵上，放置10小時后棄去溶液，收集沉淀用水洗三遍，得到二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒;

5）將0.38mmol rink amide linker溶于1ml的0.4mmol/L的HBTU/HOBt的二甲基甲酰胺（DMF）溶液中，加入69微升N,N-二異丙基乙胺（DIEA）得溶液C，并將得到的二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒加入溶液C，置于搖床上室溫反應(yīng)24小時;

6）反應(yīng)結(jié)束后將步驟5）得到的溶液置于磁鐵上，放置10小時后棄去溶液，收集沉淀用水洗三遍，得到偶聯(lián)rink amide linker的二氧化硅包殼的超順磁納米顆粒。