[發(fā)明專(zhuān)利]培養(yǎng)基及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310047417.9
• 申請(qǐng)日: 2013-02-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103205394A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裴端卿;蔡景蕾;劉朋飛;陳樹(shù)彬;張燕梅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/0735
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/0735;C12N5/071;C12N5/074
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地涉及培養(yǎng)基及其應(yīng)用，更具體地，本發(fā)明涉及培養(yǎng)基、制備上皮樣細(xì)胞的方法、用于制備成釉細(xì)胞的試劑盒以及制備成釉細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

目前，將干細(xì)胞誘導(dǎo)為特異性的組織細(xì)胞類(lèi)型，并用于相應(yīng)組織病變的治療，是現(xiàn)階段眾多疾病治療的新途徑。近年來(lái)，再生醫(yī)學(xué)及組織工程學(xué)領(lǐng)域的研究者，主要以干細(xì)胞作為種子細(xì)胞，誘導(dǎo)制備特異性的組織細(xì)胞類(lèi)型，從而為臨床上細(xì)胞、組織或器官的移植治療提供大量的材料，進(jìn)而用于糖尿病、帕金森氏病、脊髓損傷、白血病、心肌損傷、腎衰竭、肝硬化等疾病的治療，并且，目前已取得較大進(jìn)展。

然而，目前口腔再生醫(yī)學(xué)中牙齒再生的重要牙源性細(xì)胞尤其是成釉細(xì)胞的制備方法仍有待改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問(wèn)題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種制備成釉細(xì)胞的方法，以及所需的試劑盒。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明首先提出了一種培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該培養(yǎng)基為添加有N2supplement、維甲酸和BMP-4的DMEM/F12培養(yǎng)基。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明的培養(yǎng)基能夠有效地將干細(xì)胞誘導(dǎo)為上皮樣細(xì)胞，進(jìn)而，將獲得的上皮樣細(xì)胞與動(dòng)物牙胚的間充質(zhì)重組、培養(yǎng)及移植后，其能夠有效地衍生為牙樣結(jié)構(gòu)中具有分泌釉質(zhì)能力的成釉細(xì)胞，進(jìn)而能夠有效地用于牙齒再生，從而為相關(guān)口腔疾病例如牙齒缺損相關(guān)疾病的治療提供了新思路。

根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提出了一種制備上皮樣細(xì)胞的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：利用前述的培養(yǎng)基培養(yǎng)干細(xì)胞，以便使該干細(xì)胞分化為上皮樣細(xì)胞，其中，該干細(xì)胞為選自胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的至少之一。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，利用本發(fā)明的制備上皮樣細(xì)胞的方法，能夠有效地制備獲得上皮樣細(xì)胞，并且獲得的上皮樣細(xì)胞能夠有效地與動(dòng)物牙胚的間充質(zhì)重組，進(jìn)而經(jīng)培養(yǎng)及移植后，能夠有效地獲得牙樣結(jié)構(gòu)中具有分泌釉質(zhì)能力的成釉細(xì)胞。

根據(jù)本發(fā)明又一方面，本發(fā)明還提供了一種用于制備成釉細(xì)胞的試劑盒。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該試劑盒包括：第一培養(yǎng)基，該第一培養(yǎng)基為前面所述的培養(yǎng)基；和第二培養(yǎng)基，該第二培養(yǎng)基為添加有FBS、谷氨酰胺、非必需氨基酸和青鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基,其中，該第一培養(yǎng)基和第二培養(yǎng)基設(shè)置在不同的容器中。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，本發(fā)明的試劑盒能夠有效地用于牙樣結(jié)構(gòu)中具有分泌釉質(zhì)能力的成釉細(xì)胞的制備。

根據(jù)本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明還提供了一種制備成釉細(xì)胞的方法。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括以下步驟：根據(jù)前述的制備上皮樣細(xì)胞的方法，制備上皮樣細(xì)胞；將該上皮樣細(xì)胞與第一動(dòng)物牙胚的間充質(zhì)進(jìn)行重組，并對(duì)所得到的重組產(chǎn)物進(jìn)行培養(yǎng)，以便得到重組組織；將該重組組織植入第二動(dòng)物體內(nèi)并維持預(yù)定時(shí)間，以便獲得成釉細(xì)胞。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，利用本發(fā)明的制備成釉細(xì)胞的方法，能夠有效地制備獲得牙樣結(jié)構(gòu)中具有分泌釉質(zhì)能力的成釉細(xì)胞，進(jìn)而能夠有效地用于牙齒再生，從而為相關(guān)口腔疾病的治療提供了新思路。

在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提出了干細(xì)胞在制備成釉細(xì)胞中的用途。另外，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)所得到的包含成釉細(xì)胞的產(chǎn)品具有牙狀結(jié)構(gòu)。因而，本發(fā)明還提出干細(xì)胞在制備牙狀結(jié)構(gòu)中的用途。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該牙狀結(jié)構(gòu)或者成釉細(xì)胞是在哺乳動(dòng)物中進(jìn)行移植干細(xì)胞的培養(yǎng)物或者衍生物而實(shí)現(xiàn)的。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，可以采用的哺乳動(dòng)物包括但不限于小鼠、大鼠、豬、狗和猴。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，首先將干細(xì)胞誘導(dǎo)形成上皮細(xì)胞狀細(xì)胞，再進(jìn)行移植。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，可以采用的干細(xì)胞可以為胚胎干細(xì)胞，也可以為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所采用的誘導(dǎo)多能干細(xì)胞是從尿液細(xì)胞、皮膚成纖維細(xì)胞和牙周膜干細(xì)胞的至少一種獲得的。

本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過(guò)本發(fā)明的實(shí)踐了解到。

附圖說(shuō)明

本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點(diǎn)從結(jié)合下面附圖對(duì)實(shí)施例的描述中將變得明顯和容易理解，其中：

圖1顯示了根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例的制備成釉細(xì)胞的方法的流程示意圖；

圖2顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，制備上皮樣細(xì)胞時(shí)，干細(xì)胞向上皮樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中各階段的形態(tài)結(jié)構(gòu)及免疫熒光檢測(cè)結(jié)果；

圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，制備成釉細(xì)胞時(shí)，將上皮樣細(xì)胞與鼠源牙胚間充質(zhì)的重組組織移植于裸鼠腎包膜下后的觀察及檢測(cè)結(jié)果；