[發明專利]培養基及其應用

有效

• 申請號: 201310047417.9
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103205394A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 裴端卿;蔡景蕾;劉朋飛;陳樹彬;張燕梅
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735;C12N5/071;C12N5/074
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種培養基，其特征在于，所述培養基為添加有N2supplement、維甲酸和BMP-4的DMEM/F12培養基，

任選地，所述培養基含有1重量%的N2supplemen、1μM維甲酸、25ng/ml?BMP-4。

2.一種制備上皮樣細胞的方法，其特征在于，包括：

利用權利要求1所述的培養基培養干細胞，以便使所述干細胞分化為上皮樣細胞，

其中，

所述干細胞為選自胚胎干細胞和誘導多能干細胞的至少之一，

任選地，所述誘導多能干細胞衍生自選自皮膚成纖維細胞、牙周膜干細胞和尿液細胞的至少一種，

任選地，所述干細胞為衍生自尿液細胞的非整合型誘導多能干細胞。

3.一種用于制備成釉細胞的試劑盒，其特征在于，包括：

第一培養基，所述第一培養基為權利要求1所述的培養基；和

第二培養基，所述第二培養基為添加有FBS、谷氨酰胺、非必需氨基酸和青鏈霉素的高糖DMEM培養基,

其中，所述第一培養基和所述第二培養基設置在不同的容器中，

任選地，進一步包括：

第三培養基，所述第三培養基為選自mTeSR1^TM、E8培養基和KSR條件培養基的至少一種，

任選地，所述第二培養基含有：10重量%的FBS、2mM谷氨酰胺、0.1mM非必需氨基酸、100U/ml青霉素、0.1mg/ml鏈霉素。

4.一種制備成釉細胞的方法，其特征在于，包括以下步驟：

根據權利要求2所述的方法，制備上皮樣細胞；

將所述上皮樣細胞與第一動物牙胚的間充質進行重組，并對所得到的重組產物進行培養，以便得到重組組織；

將所述重組組織植入第二動物體內并維持預定時間，以便獲得成釉細胞。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，利用權利要求1所述的培養基培養干細胞5-10天，優選7天。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一動物為胎鼠，所述第二動物為裸鼠。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述第一動物牙胚的間充質是從小鼠磨牙牙胚中通過機械法分離的，

其中，

在進行機械法分離之前，利用蛋白酶對所述牙胚進行消化，

任選地，所述蛋白酶為0.75mg/ml的Dispase。

8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，利用添加有FBS、谷氨酰胺、非必需氨基酸和青鏈霉素的高糖DMEM培養基對所述重組產物進行氣液面培養，以便得到重組組織。

9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，將所述重組組織植入裸鼠的腎包膜與皮質之間，

任選地，所述預定時間為2-4周，優選3周。

10.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，在制備上皮樣細胞之前，利用選自mTeSR1^TM、E8培養基和KSR條件培養基的至少一種對所述干細胞進行培養，

其中，

在所述干細胞生長至覆蓋培養皿底部60-70%時，將培養基更換為權利要求1所述的培養基，以便獲得上皮樣細胞。