[發明專利]一種煙草中麥草畏殘留量的測定方法

有效

• 申請號: 201310046867.6
• 申請日: 2013-02-06
• 公開（公告）號: CN103149313A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 熊巍;陶曉秋;韶濟民;楊雪;龐夙;張海燕;黃玫
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司四川省公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 成都信博專利代理有限責任公司 51200
• 代理人: 舒啟龍;卓仲陽

技術領域

本發明涉及屬于農藥殘留檢驗技術領域，具體涉及煙草中麥草畏殘留量的測定方法。

背景技術

麥草畏是第一類投入商業生產的選擇性除草劑，廣泛施用于禾谷類作物田、針葉樹林和牧草場等。麥草畏都為低毒除草劑，通過植物葉面、莖桿和根系吸收傳導，阻礙植物激素的正常傳導，從而使其死亡。但在使用過程中，結果表明此類物質可以引起人類軟組織惡性腫瘤，對動物體表現出胎盤毒性。CORESTA的農用化學品咨詢委員會(ACAC)在2008年制定的118種農用化學品指導性殘留限量表中將麥草畏的限量定為0.20mg/kg。

對于水、土壤、蔬果以及紡織品中麥草畏殘留的檢測已有相關報道，而對于煙草中麥草畏殘留的檢測報道較少。V.等利用在線的液相色譜-氣相色譜聯用法測定了煙草中的麥草畏，酯化后的煙草樣品進入液相色譜分離，選取合適的保留時間段切入氣相色譜再次分離，然后通過電子捕獲檢測器檢測。劉惠民等研究開發了非水相毛細管電泳法測定煙草中的麥草畏，2，4-D和2，4，5-T殘留，其中麥草畏的檢出限為0.5μg/mL，煙草樣品經乙酸乙酯超聲萃取，凝膠滲透色譜凈化后，進入毛細管電泳儀檢測分析。宋娟梅等改進報道的毛細管電泳法，采用正交法設計實驗，優化毛細管電泳法，并將優化好的方法應用于煙草中2，4-D、2，4，5-T、麥草畏的測定。煙草行業也于2004年制定了相應的行業標準，其中麥草畏、2，4-D、2，4，5-T選取鹽酸水溶液萃取，旋轉蒸發濃縮，三甲基氫氧化锍衍生化，GC-MS分析，其前處理復雜費時，檢測時間較長，不利于高通量樣品的快速準確檢測。非水毛細管電泳法的檢出限較高，且分離度效果不如色譜方法。

超高效液相色譜-串聯質譜（UPLC-MS/MS）在農殘檢測的靈敏度以及選擇性方面都明顯優于傳統方法，在分析速度方面優于普通的HPLC方法，而目前未見該檢測方法應用檢測煙草中的麥草畏殘留量。

發明內容

鑒于此，本發明目的在于提供一種前處理簡單、檢測時間短，利于高通量樣品的快速準確的麥草畏殘留量的測定方法。

為解決以上技術問題，本發明提供的技術方案是，提供一種測定煙草中麥草畏殘留量的方法，該方法包括以下步驟：

1）提取煙草中的目標物

稱取烘干磨好的煙葉樣品，加入純水浸潤，依次加入氘代內標，乙腈和甲酸，渦漩混合振蕩。放入冰箱冷凍后取出，依次加入無水硫酸鎂，氯化鈉，檸檬酸鈉和檸檬酸二氫鈉，渦旋振蕩后離心。

2）N-丙基乙二胺（PSA）純化

移取上清液于新的離心管中，加入無水硫酸鎂及PSA吸附劑，于漩渦振蕩混合，然后高速離心。吸取上清液經有機相濾膜過濾，移取濾液，并用乙腈和超純水稀釋后待測。

3）標準儲備液和標準工作液的配制

用乙腈配置麥草畏標準儲備液，儲存于棕色玻璃瓶中，-20℃保存。取一定量的儲備液進行混合，用乙腈稀釋定容，制得混合標準儲備液（10g/mL）。

用乙腈準確配置麥草畏-d₃氘帶內標標準儲備液，儲存于棕色玻璃瓶中，-20℃保存。取一定量的內標儲備液進行混合，用乙腈稀釋定容，制得混合內標標準儲備液（10g/mL）。所有的儲備液于冰箱-20℃，使用前將其恢復到室溫。

用國際煙草科學研究合作中心（CORESTA）空白煙葉的萃取基質配制不同濃度的麥草畏標準工作溶液；

4）液相色譜-串聯質譜（LC-MS/MS）測定：吸取空白煙葉溶液和配制好的不同濃度的麥草畏標準工作溶液，注入LC-MS/MS系統，按內標法以峰面積計算出樣品待測液中麥草畏含量。

優選地，所述煙葉的重量為2g。

優選地，步驟1）中所述冷凍時間為10min，冷凍溫度為-18至-15℃。

優選地，步驟1）中提取過程依次加入的超純水，氘代內標(10g/mL)，乙腈和甲酸(49-51%)的體積分別為10mL，20L，10mL和200L。渦旋振蕩（2000rpm）1min。離心管在-10℃條件下保持10min。依次加入的無水硫酸鎂，氯化鈉，檸檬酸鈉和檸檬酸二氫鈉的質量分別為4g，1g，1g和0.5g。然后漩渦混合振蕩的速率為2000rpm，振蕩時間為2min，離心（4000rpm）時間為10min。

優選地，步驟2）中，加入無水硫酸鎂及PSA吸附劑的質量為150mg和25mg。

優選地，所述步驟（2）中移取濾液體積為200L，加入乙腈和超純水的體積為100L和700L。