[發明專利]一種產長鏈二元酸的熱帶假絲酵母菌的誘變方法

無效

• 申請號: 201310045582.0
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103074325A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 徐杰;王強
• 申請（專利權）人: 徐杰
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01;C12N13/00;C12N1/16;C12R1/74
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務所 65106
• 代理人: 李靜

技術領域

本發明涉及一種產長鏈二元酸的熱帶假絲酵母菌的誘變方法，該方法以提高長鏈二元酸的產酸量和正構烷烴的轉化率。

背景技術

長鏈二元酸是重要的精細化工中間體，可以合成香料、特種尼龍、聚酰胺熱熔膠等一系列高附加值的特殊化學品，而長鏈二元酸不能從自然界中直接獲得，化學合成又有許多難以克服的弊端，因此利用微生物技術制取長鏈二元酸引起了國內外的高度重視。

早在20世紀60年代國外就開始了利用微生物氧化正構烷烴制取長鏈二元酸的研究，但產酸量很低，難以實現工業化生產。日本礦業公司將選出的產酸能力最強的熱帶假絲酵母菌（No.1098菌株）經化學誘變和紫外線誘變，得到變異株M2030，該菌株發酵120小時，產酸130g/L。1977年日本礦業公司利用微生物氧化技術，以正構烷烴為原料成功的開發出制造長鏈二元酸技術，1982年建成年產100噸十三烷二元酸的工業化裝置。

我國微生物發酵制取長鏈二元酸的研究工作開始于20世紀70年代，1999年在山東淄博建成利用微生物技術年產1000噸長鏈二元酸的生產裝置。2005年后山東濟寧、青島、煙臺等地陸續建成利用微生物技術年產3000-8000噸的長鏈二元酸生產裝置。

生產長鏈二元酸的菌種的誘變篩選方法報道較多的有亞硝基胍誘變、紫外線照射誘變和離子束注入誘變，而采用放射源鈷60γ-射線進行誘變的未見有報道。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種產長鏈二元酸的熱帶假絲酵母菌的誘變方法，該方法是先制備培養基，將熱帶假絲酵母菌接種于培養基上，采用放射源鈷60γ-射線進行誘變，并用誘變篩選培養基系統篩選獲得高產長鏈二元酸的熱帶假絲酵母菌突變菌株，從而提高長鏈二元酸的產酸量和正構烷烴的轉化率。

本發明所述的一種產長鏈二元酸的熱帶假絲酵母菌的誘變方法，按下列步驟進行：

制備培養基：

a、麥芽汁培養基:12Brix麥芽汁，2%瓊脂；

b、種子培養基：各組份為磷酸二氫鉀5.0-6.0g，氯化鈉1.0-1.5g，七水合硫酸鎂0.5-1.0g，蔗糖15.0-25.0g，玉米漿1.0-2.0g，酵母浸膏1.0-2.0g，尿素2.5-3.0g，維生素B₁0.1-0.3g，正構烷烴nC₈-nC₁₈40-50ml，純水1000ml；

c、篩選培養基：

篩選培養基Ⅰ：各組份為磷酸二氫鈉2.0-3.0g，磷酸氫二鉀5.0-6.0g，硫酸銨2.0-3.0g，氯化鈉1.0-1.5g，酵母浸膏0.5-1.0g，七水合硫酸鎂0.5-1.0g，瓊脂15.0-20.0g，正構烷烴nC₈-nC₁₈20-50ml，純水1000ml，pH7.0；

篩選培養基Ⅱ：各組份為磷酸二氫鈉2.0-3.0g，磷酸氫二鉀5.0-6.0g，氯化鈉1.0-1.5g，酵母浸膏0.5-1.0g，硫酸銨2.0-3.0g，七水合硫酸鎂0.5-1.0g，瓊脂15.0-20.0g，蔗糖15.0-20.0g，純水1000ml，pH7.0；

篩選培養基Ⅲ：各組份為蔗糖15.0-20.0g，磷酸二氫鈉2.0-3.0g，磷酸氫二鉀5.0-6.0g，氯化鈉1.0-1.5g，七水合硫酸鎂0.5-1.0g，酵母浸膏0.5-1.0g，尿素1.5-2.0g，瓊脂15.0-20.0g，正構烷烴nC₈-nC₁₈20-50ml，純水1000ml，pH7.5，酚紅指示劑1%；

d、發酵培養基：各組份為磷酸二氫鉀5.0-6.0g，氯化鈉1.0-1.5g，七水合硫酸鎂0.5-1.0g，蔗糖15.0-25.0g，玉米漿1.0-2.0g，酵母浸膏1.0-2.0g，無水醋酸鈉3.0-4.0g，尿素2.0-3.0g，維生素B₁0.1-0.3g，硫酸銨2.0-3.0g，丙烯酸0.001-0.002g，正構烷烴nC₈-nC₁₈300-400ml，純水1000ml；

熱帶假絲酵母菌的誘變：