[發(fā)明專利]一種利用超聲波從林蛙體中提取抗菌肽的生產(chǎn)制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310044262.3
• 申請日: 2013-02-01
• 公開（公告）號: CN103073628A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林萬君;陸軍;滕利榮;孟慶繁;逯家輝;王娟
• 申請（專利權(quán)）人: 通化康元生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/14
• 代理公司: 通化旺維專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 22205
• 代理人: 王偉

1.?一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產(chǎn)制備方法，其特征在于采用除塵除雜除脂除卵的林蛙干體為原料制備。

2.如權(quán)利要求書1所述的一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產(chǎn)制備方法，其特征在于其步驟如下：

（1）原料：林蛙干體；

（2）加10-20倍于蛙體的4-8%醋酸于10-30℃溶脹0.5-1.5小時；

（3）將溶脹后的蛙體及醋酸液，在功率為100-250W,頻率為20-60kHz超聲波發(fā)生器內(nèi)進(jìn)行超聲提取至少一次；提取時間10－40分鐘，過濾，得提取液；

（4）提取液，在3000-10000p.r.m/10-20min條件下離心，棄去沉淀，收集上清液；

（5）在35℃-65℃溫度下加熱5-15min，然后降至5-10℃過濾，得抗菌肽濾清液。

3.如權(quán)利要求書2所述的一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產(chǎn)制備方法，其特征在于按步驟（3）、（4）重復(fù)操作1－3次；合并上清液，再按步驟（5）進(jìn)行。

4.如權(quán)利要求書3所述的一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產(chǎn)制備方法，其特征在于在步驟（5）后，將抗菌肽濾清液在30-60℃和-0.5個大氣壓條件下濃縮至1/3-1/10體積，抗菌肽濃縮液于0-4℃條件下保存。

5.如權(quán)利要求書4所述的一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產(chǎn)制備方法，其特征在于其步驟如下：

（1）取林蛙干體50g，進(jìn)行去塵除雜處理；

（2）加15倍于蛙體的6%醋酸750?mL于15℃溶脹0.3小時；

（3）溶脹后的蛙體，放入功率為150W,頻率為30kHz的超聲波中提取10分鐘；在步驟（2）、（3）同樣條件下，再提取1次；

（4）合并提取液，在5000p.r.m,15min離心，棄去沉淀，收集上清，重復(fù)操作步驟（3）、（4）兩次；

（5）合并上清液，在55℃環(huán)境下加熱10min后降至10℃過濾；

（6）在45℃環(huán)境下，在-0.5個大氣壓條件下濃縮至1/5體積；?

（7）收集濃縮液于4℃條件下保存。

6.如權(quán)利要求書5所述的一種利用超聲波從林蛙體中直接提取抗菌肽的生產(chǎn)制備方法，其特征在于抗菌肽具有如下特征；

（1）熱穩(wěn)性：抗菌肽60℃?6小時不失活，95℃?10min還有活力；

（2）pH值穩(wěn)定性：在pH2-6范圍內(nèi)活力穩(wěn)定，最適合pH值3.5；

（3）等電點(diǎn)：用pH值調(diào)節(jié)采用吸光度法測定林蛙抗菌肽pI值，pI值為8.0-10.5的堿性多肽；

（4）分子量：采用凝膠過濾層析法、聚丙稀酰氨垂直板電泳法及激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜法，測得分子量為?4KDa。