[發(fā)明專利]一種油菜單粒種子基因組DNA高通量快捷提取方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310044228.6
• 申請(qǐng)日: 2013-02-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103060311A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳鋒;張潔夫;戚存扣;陳松;浦慧明;付三雄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 張素卿

1.一種油菜單粒種子基因組DNA高通量快捷提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)?發(fā)芽：在培養(yǎng)皿內(nèi)鋪濾紙，加水至完全濕潤(rùn)濾紙，將油菜種子均勻撒在濾紙上，蓋上培養(yǎng)皿蓋，放入培養(yǎng)箱中，37℃暗培養(yǎng)12-16小時(shí)至根長(zhǎng)3-5mm；

(2)?取材：將破皮萌發(fā)的油菜種子去種皮，放入0.2mL?96孔PCR板，每孔一粒；

(3)?裂解：每孔加20μL?0.25mol/L?NaOH，在PCR儀上99.9℃?1min；

(4)?提取：每孔加5μL?1mol/L?HCl中和，再加入25μL?0.5mol/L?Tris-HCl(pH8.0)，在PCR儀上99.9℃?3min；

(5)?沉淀：待PCR板自然冷卻，用鑷子取出提取液中油菜種子，加入100μL?預(yù)冷無(wú)水乙醇，蓋上PCR板封口膜，上下?lián)u勻20次；

(6)?離心：板式離心機(jī)離心PCR板，3000rpm，10min，棄上清；

(7)?干燥：將PCR板置入真空干燥儀，35℃真空干燥5min；

(8)?溶解：每管加入50μL滅菌ddH₂O，37℃完全溶解DNA，4℃保存。