[發(fā)明專利]茉莉酸甲酯應(yīng)答的人參PgPDR3基因啟動(dòng)子及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310043896.7
• 申請日: 2013-02-05
• 公開（公告）號: CN103103194A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅志勇;張儒;祝捷;黃景嘉;陳湘暉;李繼佳
• 申請（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00
• 代理公司: 中南大學(xué)專利中心 43200
• 代理人: 胡燕瑜

1.茉莉酸甲酯應(yīng)答的人參PgPDR3基因啟動(dòng)子，其特征在于：該啟動(dòng)子的DNA序列如SEQ?ID?NO.1所示，或是與SEQ?ID?NO.1具有99%以上同源性的DNA序列。

2.如權(quán)利要求1所述的啟動(dòng)子的制備方法，其特征在于依次為以下步驟：提取人參根基因組總DNA，以人參根總DNA為模板，構(gòu)建四個(gè)啟動(dòng)子文庫：DraI文庫、EcoR?V文庫、Pvu?II文庫和Stu?I文庫；分別以構(gòu)建的DraI文庫、EcoR?V文庫、Pvu?II文庫和Stu?I文庫為模板，根據(jù)人參PgPDR3基因的5′端序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；膠回收PCR產(chǎn)物，該產(chǎn)物即得本發(fā)明所述的啟動(dòng)子ProPDR3。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于：所述根據(jù)人參PgPDR3基因的5′端序列設(shè)計(jì)的引物包括外側(cè)引物Pro3-SP和巢式引物Pro3-Nest-SP，外側(cè)引物Pro3-SP如SEQ?ID?NO.2所示，巢式引物Pro3-Nest-SP如SEQ?ID?NO.3所示。

4.含有權(quán)利要求1所述啟動(dòng)子的重組載體，其特征在于：所述重組載體為pCAMBIA1301-ProPDR3::GUS，所述空載體為pCAMBIA1301載體，在ProPDR3啟動(dòng)子的下游連接GUS報(bào)告基因。

5.如權(quán)利要求4所述的重組載體的構(gòu)建方法，其特征在于構(gòu)建步驟為：（1）根據(jù)啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)片段相對應(yīng)的包含Bam?HI/Nco?I酶切位點(diǎn)的特異引物；（2）分別用Bam?HI和Nco?I雙酶切pCAMBIA1301和啟動(dòng)子ProPDR3，回收pCAMBIA1301載體和ProPDR3啟動(dòng)子片段；（3）將兩片段連接并轉(zhuǎn)化DH5α，通過卡那霉素篩選、PCR鑒定和Bam?HI/Nco?I雙酶切鑒定，即獲得所述重組載體pCAMBIA1301-ProPDR3::GUS。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述步驟（1）中根據(jù)啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)片段相對應(yīng)的包含Bam?HI/Nco?I酶切位點(diǎn)的特異引物如SEQ?ID?NO.4和SEQ?ID?NO.5所示。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述步驟（3）中PCR鑒定所設(shè)計(jì)的引物對如SEQ?ID?NO.6和SEQ?ID?NO.7所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述啟動(dòng)子ProPDR3在調(diào)控人參皂苷轉(zhuǎn)運(yùn)與積累或人參育種中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組載體pCAMBIA1301-ProPDR3::GUS在調(diào)控人參皂苷轉(zhuǎn)運(yùn)與積累或人參育種中的應(yīng)用。