[發(fā)明專利]一種湖州百合組培快繁方法

有效

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• 申請日: 2013-02-04
• 公開（公告）號: CN103109743A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設計）人: 吳昀;常樂;夏宜平;張琳;馬怡迪;張佳平
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術領域，尤其涉及一種湖州百合組培快繁方法。

背景技術

食用百合是野生百合經過多年良種馴化、品種篩選及人工栽培后，可供食用、安全無毒的食品，是我國經濟價值較高的上等蔬菜，具較好的藥用價值和保健功能。

食用百合可分為甜百合和苦百合兩大類，蘭州百合、龍牙百合、卷丹、川百合即為國內主要的食用百合。卷丹又名虎皮百合、南京百合，屬于苦百合類食用百合，野生種在我國分布廣泛，而以食用作為栽培目的則主要集中在江浙地區(qū)。

湖州百合（Lilium?lancifolium）是卷丹的一個生態(tài)型，已有五六百年的栽培歷史，主要分布在湖州市的太湖、漾西、塘甸等鄉(xiāng)鎮(zhèn)，是浙江省的傳統(tǒng)特產。湖州百合栽培種鱗莖個大，肉質細嫩，營養(yǎng)（蛋白質、糖、礦物質及多種維生素）豐富，味甘中帶微苦，風味獨特，且含微量秋水仙堿等多種藥理成分，有潤肺化痰、安心寧神、清熱利尿、健胃益脾、補中益氣等功效，并具一定抗癌作用，被譽為“百合之王”。湖州百合除鮮食外，還被加工成百合干、百合粉、百合罐頭、百合飲料等加以出售。

隨著我國人民生活水平的提高和飲食結構的改變，清涼滋補的百合，作為藥膳被人們所青睞，需求量逐年增加。然而，湖州百合雖種植歷史悠久，但由于該地農民長期使用當地老品種，不注意提純復壯，而小鱗莖、珠芽、鱗片扦插的無性繁殖方法，均導致后代容易積累病毒，使得百合病毒病頻發(fā)，加之新種質缺乏，導致品種退化現象嚴重。此外，傳統(tǒng)繁殖方式主要是去大留小，周期長，占有耕地且降低產量，大大增加了種植成本。

目前，植物快繁技術在以無性繁殖為主的園藝作物上應用廣泛，技術也相對成熟。利用組織培養(yǎng)繁殖湖州百合，可在短期內獲得保持原有品種優(yōu)良性狀的大量種苗，大大提高其產量和品質。因此，若能推行組培工廠化育苗方式，不僅能使一些優(yōu)良株系得到迅速推廣，且能大大節(jié)約留種成本，產生顯著經濟效益。目前，針對蘭州百合、細葉百合、野百合及東方系百合等的組培育苗的已有很多研究，但是不同種百合，因基因型等遺傳背景差異，其所需的技術條件差別很大。而對湖州百合組培快繁技術進行系統(tǒng)研究還未見報道，特別是百合的鱗莖生長于地下，帶菌多，使得組培快繁過程中的消毒過程難度加大，始終存在著污染率較高的問題。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種湖州百合組培快繁方法，具有高誘導率及增殖倍數，且在獲取無菌苗的過程中污染率及死亡率均較低。

一種湖州百合組培快繁方法，包括：

（1）將洗凈的湖州百合的鱗片置于200~300mg/L甲基托布津中震蕩0.3~1h后，于70~75%酒精中浸泡20~30s，再浸入質量體積濃度為0.1%~0.2%升汞中15~25min，沖洗干凈；

（2）將沖洗干凈的鱗片接至誘導培養(yǎng)基進行誘導培養(yǎng)；

（3）誘導出芽后，轉移到增殖培養(yǎng)基進行增殖培養(yǎng)，獲得叢生芽；

（4）將叢生芽接至壯球生根培養(yǎng)基，獲得無菌苗；

其中，所述誘導培養(yǎng)基為：瓊脂，6~8g/L；蔗糖，30~35g/L；MS粉，4~5g/L；6-BA，0.5~1.0mg/L；NAA，0.1~0.5mg/L；

所述增殖培養(yǎng)基為：瓊脂，6~8g/L；蔗糖，60~65g/L；MS粉，4~5g/L；6-BA，1.0~1.5mg/L；NAA，0.1~0.2mg/L；

所述壯球生根培養(yǎng)基為：瓊脂，6~8g/L；蔗糖，70~80g/L；MS粉，4~5g/L；NAA，0.1~0.2mg/L；活性炭，2~3g/L。

所述湖州百合的鱗片在洗凈消毒前置于2~4℃處理1~4周。

將外植體材料進行一段時間的低溫處理，不僅可以減少組織褐化現象的發(fā)生，提高誘導率，還能有效降低外植體的帶菌率。但低溫時間過長過短均不適宜，時間過長易滋生真菌，過短則達不到降低污染率的作用，優(yōu)選的，所述處理的時間為2~4周，更優(yōu)選為2周。

將甲基托布津、酒精和升汞配合使用，可進行深度滅菌，達到比單一消毒劑更好的消毒效果。另外，需嚴格控制消毒劑的濃度和消毒時間，防止殺死外植體細胞，影響誘導率。

甲基托布津是一種廣譜性的高效、低毒、低殘留的內吸殺菌劑，被植物吸收后轉化為多菌靈，干擾真菌有絲分裂中紡錘體的形成，影響細菌細胞分裂，使細胞壁中毒，孢子萌發(fā)長出的芽管畸形，從而殺死病菌。

優(yōu)選的，所述甲基托布津的濃度為250~300mg/L，震蕩時間為0.3~0.45h；更優(yōu)選的，所述甲基托布津的濃度為250mg/L，震蕩時間為0.3h。