[發明專利]斯奈克氏菌AUH-JLC159及其轉化制備(-)-5-OH-雌馬酚的方法

有效

• 申請號: 201310043107.X
• 申請日: 2013-02-04
• 公開（公告）號: CN103275884A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 王秀伶;劉子光;邵子強;梁曉琳;張紅蕾;郭常亮
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/06;C12R1/01
• 代理公司: 石家莊國為知識產權事務所 13120
• 代理人: 李榮文

1.一種斯奈克氏菌（Slackia?sp.）AUH-JLC159，保藏號為CGMCC?No.5304。

2.如權利要求1所述的斯奈克氏菌AUH-JLC159轉化制備(-)-5-OH-雌馬酚的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）菌株AUH-JLC159的培養

將低溫冷凍保存的斯奈克氏菌AUH-JLC159融化并按15～20%接種量接種到盛有新鮮BHI液體培養基的試管中，在厭氧工作站內37???????????????????????????????????????????????下培養24小時；再以15%接種量將試管中的菌株AUH-JLC159重新轉接到盛有新鮮BHI液體培養基中，繼續在厭氧工作站內培養20～24小時作為種子液；

（2）底物染料木素與菌株AUH-JLC159共培養與代謝產物的分離純化

①底物染料木素與菌株AUH-JLC159共培養

將菌株AUH-JLC159的種子液按15～20%接種量轉接到BHI液體培養基中培養，根據染料木素母液中底物染料木素及三角瓶中培養基體積，確定母液加入量，使得染料木素在培養基中的濃度為0.4～0.6毫摩爾/升，染料木素母液中底物染料木素濃度為40～60毫摩爾/升，在厭氧工作站內培養2～3天即可將底物染料木素轉化為(-)-5-OH-雌馬酚；

②代謝產物的分離純化

用等體積的乙酸乙酯將三角瓶內培養物萃取2次，萃取液過濾后蒸干，加入100%甲醇溶液，用制備柱在HPLC上進行分離制備(-)-5-OH-雌馬酚。