[發(fā)明專(zhuān)利]鬼針草離體再生體系建立的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310041916.7
• 申請(qǐng)日: 2013-02-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103053428A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔波;李長(zhǎng)看;蔣素華;田云芳;王默霏;馬杰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 鄭州師范學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專(zhuān)利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張曉萍

1.鬼針草離體再生體系建立的方法，其特征在于本方法分五個(gè)階段：無(wú)菌材料的獲得：取鬼針草種子經(jīng)MS培養(yǎng)基培養(yǎng)得到無(wú)菌苗；不定芽培養(yǎng)：由無(wú)菌苗外植體—下胚軸和子葉經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)生成不定芽，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+6-BA?0.1～3.0?mg/L+KT?0.1～3.0mg/L+NAA0.1mg/L+3%蔗糖+0.9%瓊脂；繼代增殖培養(yǎng)：將不定芽切分進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)分化得到叢生芽，增殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基+6-BA0.1～3.0mg/L+KT0.1～3.0mg/L+NAA0.1mg/L+3%蔗糖+瓊脂0.9%；生根苗培養(yǎng)：將叢生芽分株經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得生根苗,形成完整植株，生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA?0.1～0.5mg/L+3%蔗糖+0.9%瓊脂；練苗移栽：將生根苗經(jīng)煉苗后由培養(yǎng)基移栽到土壤中。

2.如權(quán)利要求1所述的鬼針草離體再生體系建立的方法，其特征在于：無(wú)菌材料的獲得是將鬼針草的果實(shí)置于75％乙醇中浸泡15s滅菌，取出后用無(wú)菌水沖洗3-5次，加入0.1％氯化高汞滅菌，時(shí)間控制為8min，滅菌的果實(shí)用無(wú)菌水沖洗4-5次，用無(wú)菌濾紙吸干水分，刨開(kāi)果實(shí)取出種子接種于MS固體培養(yǎng)基上，接種后放入光照培養(yǎng)箱，獲得無(wú)菌苗，整個(gè)操作在超凈工作臺(tái)進(jìn)行。

3.如權(quán)利要求1所述的鬼針草離體再生體系建立的方法，其特征在于：不定芽培養(yǎng)是取用無(wú)菌苗的外植體—子葉和下胚軸，子葉切成0.5cm²大小，葉背向下置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基，下胚軸切成0.3～0.5cm長(zhǎng)短平放于誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，5d形成淡黃綠色愈傷，子葉誘導(dǎo)率90%～95%，下胚軸誘導(dǎo)率100%。

4.如權(quán)利要求1所述的鬼針草離體再生體系建立的方法，其特征在于：繼代增殖培養(yǎng)是將不定芽切分，接種至增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，10～18d分化出叢生芽，芽增殖倍數(shù)為3～6倍。

5.如權(quán)利要求1所述的鬼針草離體再生體系建立的方法，其特征在于：叢生芽長(zhǎng)至約2～3cm時(shí)將其分成單株置于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)進(jìn)行生根培養(yǎng)，7～10d分化出5～8條不定根，得到生根苗，形成完整植株，生根率100%。

6.如權(quán)利要求1所述的鬼針草離體再生體系建立的方法，其特征在于：煉苗移栽是先將培養(yǎng)瓶置于智能溫室，溫度保持在25℃左右，打開(kāi)瓶口讓瓶?jī)?nèi)生根苗與空氣接觸?5～7d，然后用流水洗去生根苗根部的培養(yǎng)基，用0.1%的高錳酸鉀溶液對(duì)根部滅菌消毒1min，將其移栽到消毒的栽培基質(zhì)中培養(yǎng)得到再生植株，栽培基質(zhì)的配比為泥炭土+蛭石=2:1，再生植株成活率達(dá)95%以上。

7.如權(quán)利要求1所述的鬼針草離體再生體系建立的方法，其特征在于：無(wú)菌材料的獲得、不定芽培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)和生根苗培養(yǎng)的培養(yǎng)條件均為溫度23±2℃，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000～3000Lux，夜間保持黑暗。