[發(fā)明專利]旋毛蟲肌幼蟲ES抗原基因疫苗及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310040669.9
• 申請日: 2013-02-03
• 公開（公告）號: CN103352047A
• 公開（公告）日: 2013-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊桂連;王春鳳;楊文濤;劉高升;趙葛
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/79
• 分類號: C12N15/79;C12N15/12;A61K48/00;A61P33/00
• 代理公司: 長春市東師專利事務(wù)所 22202
• 代理人: 張鐵生

1.旋毛蟲肌幼蟲重組43ku?ES抗原基因的真核表達載體pVAXⅠ-43ku，它是在真核表達載體pVAXⅠ中插入了43ku基因，所述的43ku其堿基序列如序列表SEQID?No.1所示。

2.旋毛蟲肌幼蟲重組45ku?ES抗原基因的真核表達載體pVAXⅠ-45ku，它是在真核表達載體pVAXⅠ中插入了45ku基因，所述的45ku其堿基序列如序列表SEQID?No.2所示。

3.旋毛蟲肌幼蟲ES抗原基因疫苗，它包括：重組質(zhì)粒pVAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-45ku，它們的堿基序列如序列表SEQID?No.1和2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的旋毛蟲肌幼蟲ES抗原基因疫苗，其特征在于：VAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-45ku的重量比為1∶1；

根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的旋毛蟲肌幼蟲ES抗原基因疫苗，其特征在于：所述的pVAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-45ku的濃度均為1μg/μL。

5.旋毛蟲肌幼蟲ES抗原基因疫苗制備方法，包括：

（1）制備旋毛蟲肌幼蟲總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，并以cDNA為模板，用引物：

43ku?-P1：5’-CGCGGTACCATGCGAATATACATTTTTCTTAG-3’

43ku?-P2：5’-CGAGGATCCTTAGCTGTATGGGCAA-3’

45ku?-P1：5’-CGCGGTACCATGAAACTCTTGCTTTTAACA-3’

45ku?-P2：5’-GCGGATCCTTAGCCTTGCTTAGAGAG-3’

PCR方法分別擴增43ku、45ku?ES抗原基因，43ku、45ku基因其堿基序列如序列表SEQID?No.1、2所示；

（2）將43ku、45ku基因分別插入pVAXⅠ真核表達載體中，構(gòu)建重組真核表達載體pVAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-43ku；

（3）將兩種重組真核表達載體分別轉(zhuǎn)入E.coli?DH5α中，接種于LB液體培養(yǎng)基，37℃，150-180?r/min搖床培養(yǎng)；

（4）從上述培養(yǎng)的E.coli?DH5α中大量制備pVAXⅠ-43ku和pVAXⅠ-45ku，并調(diào)整二者濃度后混合。