[發明專利]伊犁馬育種方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201310040054.6
• 申請日: 2013-02-01
• 公開（公告）號: CN103181361B
• 公開（公告）日: 2017-04-12
• 發明（設計）人: 賀三剛;李文蓉;劉明軍;耿娟;張寧;張雪梅;劉晨曦;鄭新寶;董紅
• 申請（專利權）人: 新疆維吾爾自治區畜牧科學院中國-澳大利亞綿羊育種研究中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及動物分子生物學和育種領域，具體的說，涉及一種提高伊犁馬體尺性狀的育種方法及其試劑盒。

背景技術

馬肉質味極佳，越來越受到消費者青睞，價格平穩上揚。近年來，隨著人們對馬肉理化特性和營養價值進一步認識，逐漸明確了它們所具有的特殊作用。馬肉瘦肉多、脂肪少，含較多的不飽和脂肪酸，這種不飽和脂肪酸能抵消飽和脂肪酸促使血管中膽固醇沉積的有害過程等優點，馬肉中膽固醇含量低，每100g可食肉中膽固醇含量僅為10.4-31.9mg，因此有很好的防止動脈血管粥樣硬化的作用。國內馬肉消費主要集中在新疆、內蒙等喜食馬肉的少數民族聚集區，馬肉市場銷售量逐年上升。新疆馬肉產量2000年3.57萬噸，2008年達到4.8萬噸。目前，國內馬肉的產量已經無法滿足消費者日益增長的需求。同時在國際市場上也成為熱銷商品，因此發展肉用養馬業勢在必行。伊犁昭蘇馬場近年來從國外和東北引進了大量的大型阿爾登馬對當地的伊犁馬進行雜交改良，進行肉用馬新類型的培育。但是馬作為大家畜，其世代間隔長，且馬的主要經濟性狀的遺傳力低，用傳統的育種方法很難獲得較為顯著的遺傳進展。要在常規的雜交和選優交配培育馬的基礎上，需要篩選與馬的肉用性能密切相關的DNA標記，利用分子標記輔助選擇技術，實現早期選種和選種的準確性，加速伊犁馬肉用新類群的培育工作。

生長發育性狀，屠宰性能和肉品質是評價馬肉用性能的主要指標。馬的體尺性狀的準確測定能夠評估生長發育性狀，因此我們通過鑒定與馬的體尺性狀相關的SNP標記，進行肉用馬的標記輔助選擇，加速伊犁馬肉用新類群的培育工作。

發明內容

本發明的目的是提供一種伊犁馬的育種方法和試劑盒，通過檢測與伊犁馬肉用新類群體尺性狀相關的SNP標記，該位點位于如SEQ?ID?NO.1所示的170bp處，通過分子生物學技術檢測該標記，利用該標記輔助選擇有利的個體留種，以顯著提高伊犁馬肉用新類群的體尺性狀，即體高，體長，胸圍和管圍，加速伊犁馬肉用新類群的培育。

本發明一方面涉及一種伊犁馬的育種方法，其特征在于包括如下步驟：提取伊犁馬父本和/或母本血液中的DNA，針對SEQ?ID?NO.1中170bp處的SNP多態性位點，根據SEQ?IDNO.1序列分別在其160bp上游、180bp下游設計適合的、與其核苷酸互補的正向、反向引物，采用正反向引物進行擴增，擴增產物使用Alu?I限制性內切酶進行酶切，酶切產物使用凝膠電泳進行檢測，選擇在凝膠電泳中出現2或者3條條帶的父本和/或母本作為育種的父本和/或母本。

在本發明的一個優選實施方式中，其特征在于上游正向引物為：5’-TGGAGTCAGTTGGGTTTAATG-3’和/或下游的反向引物5’-GACCGGATAGCATAGAGAGAG-3’，選擇在凝膠電泳中284bp，169bp，115bp附近有2或者3條條帶的父本和/或母本作為育種的父本和/或母本。

在本發明的另一個優選實施方式中，其特征在于選擇在284bp，169bp，115bp附近僅有2條條帶的父本和/或母本作為育種的父本和/或母本，優選的，所述的條帶位于169bp和115bp附近。

在本發明的另一個優選實施方式中，其特征在于還包括針對所培育的子代進行相同的篩選步驟。

本發明另一方面還涉及一種伊犁馬育種的試劑盒，其特征在于包括正向引物F：5’-TGGAGTCAGTTGGGTTTAATG-3’、反向引物R：5’-GACCGGATAGCATAGAGAGAG-3’、Alu?I限制性內切酶，任選的，包括PCR和/或凝膠電泳所需要的其它試劑。

本發明還涉及上述試劑盒在提高伊犁馬體高和/或體長和/或胸圍和/或管圍中的應用。

采用本發明的方法和試劑盒能夠顯著提高伊犁馬肉用新類群的體尺性狀，即體高，體長，胸圍和管圍，加速伊犁馬肉用新類群的培育。

具體實施方式：

1.與伊犁馬體尺性狀相關的SNP的獲得

(1)伊犁馬基因組DNA的提取

采集伊犁馬血液，使用肝素納抗凝，采取天根血液基因組試劑盒提取伊犁馬基因組DNA，0.8％瓊脂糖凝膠電泳檢測，核酸蛋白定量儀測定其濃度和純度，稀釋至50ng/ul，保存備用。(2)目的片段的擴增