[發明專利]一種表達豬胰高血糖素樣肽-2的重組嗜酸乳桿菌的構建方法及用途

有效

• 申請號: 201310037473.4
• 申請日: 2013-01-31
• 公開（公告）號: CN103103210A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發明（設計）人: 侯永清;吳濤;竇茂鑫;趙迪;丁斌鷹
• 申請（專利權）人: 武漢工業學院
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N1/21;A23K1/18;A23K1/16;C12R1/23
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 狄宗祿

技術領域

本發明屬于畜牧獸醫技術領域，尤其涉及一種表達豬胰高血糖素樣肽-2的重組嗜酸乳桿菌的構建方法及其在促進豬腸道健康中的應用。?

背景技術

在當前，養豬業已成為關系國計民生的重要產業。在養豬生產中，仔豬是生長發育最快、飼料利用率最高、開發潛力最大的一個階段，仔豬飼養的好壞直接影響豬整個飼養期的生產成績。然而，仔豬階段也是生存能力、生理機能最脆弱的階段，仔豬死亡率通常占整個飼養期死亡率的70%。仔豬成活率低和生長緩慢是目前我國養豬生產中面臨的主要問題，提高仔豬飼養成績是保障養豬業快速發展的關鍵。?

動物腸道不僅是動物體內最大的消化吸收器官，是所有營養物質最終的吸收場所，同時也是體內最大的免疫器官，仔豬腸道健康發育是快速生長與高成活率的生理基礎。新生仔豬由于腸道處于快速發育之中，結構與功能不完善，養分的消化吸收與免疫屏障功能有很大的局限性，難以適應營養與環境的變化，增加了飼養的困難。仔豬哺乳期間，初乳和常乳中都含有高水平的、可促進腸道發育和成熟的生長因子，如谷氨酰胺、表皮生長因子、胰高血糖素樣肽-2、類胰島素生長因子和多胺等，斷奶后，這些因子消失，對腸細胞生長、分化及細?胞功能的發育產生不良影響。仔豬斷乳后由于受營養、生理、環境和病原微生物等多種應激因素的影響，導致腸道黏膜萎縮、腸道上皮完整性和腸道屏障作用被破壞以及腸道功能紊亂，引起消化不良、腹瀉、生長抑制，甚至死亡。據統計，斷奶仔豬腹瀉率一般在20%～30%，腹瀉死亡率占仔豬總死亡率的40％。因此，生產實際中迫切需要采取有效措施促進仔豬腸道健康發育、改善消化吸收與免疫屏障功能。?

豬胰高血糖素樣肽-2作為豬乳中含量較高的生長因子之一，它對初生仔豬胃腸道發育有著極其重要影響。?

在腸道，GLP-2以一種依賴營養的方式由腸L內分泌細胞(大多數分布于回腸末端和盲腸)分泌，主要刺激物是機體攝取的營養成分包括葡萄糖、脂肪酸和食物纖維等。Drucker等(1999)報道胃腸道攝人營養物質對GLP-2的影響的最初研究結果表明，長期服用GLP-2對胃腸道有潛在作用，GLP-2能促進新生仔豬小腸的重量、長度和腸絨毛高度的增加并呈劑量依賴效應；GLP-2通過促進腸隱窩細胞的增生，抑制腸上皮細胞和隱窩細胞的凋亡，促進成年小鼠小腸和大腸的濕重增加；GLP-2促進了健康志愿者對營養物質的吸收。總結起來其功能主要包括以下6個方面：①調節胃腸道蠕動等活動；②促進腸道和黏膜的生長；③促進小腸上皮細胞增殖，抑制細胞凋亡；④對腸道疾病的治療作用；⑤增加小腸血流量，促進營養物質的吸收；⑥維持腸道屏障功能，促進損傷修復。?

早期斷奶是縮短母豬生育周期的重要手段，而早期斷奶導致的斷奶應激是影響早期斷奶仔豬生產性能的主要原因，通過在飼料中添?加胰高血糖素樣肽-2可以緩解斷奶應激。盡管豬胰高血糖素樣肽-2憑借其獨特的理化特性以及顯著的生理作用，作為飼料添加劑具有廣闊的發展前景，但是目前生產的豬胰高血糖素樣肽-2都是從乳產品中獲得或利用大腸桿菌表達系統表達所得，這兩種途徑都具有一定的局限性，從乳中分離豬胰高血糖素樣肽-2的量有限，很難滿足市場需要，而利用大腸桿菌表達系統表達的豬胰高血糖素樣肽-2，由于宿主菌大腸桿菌的局限性不能直接作為飼料添加使用，存在著分離純化的難題，增加了添加成本，很難滿足市場需要，??

鑒于此本發明以公認安全的微生物嗜酸乳桿菌為載體菌，構建能夠表達豬胰高血糖素樣肽-2的重組嗜酸乳桿菌，并以此重組嗜酸乳桿菌作為飼料添加劑。該載體菌屬于革蘭氏陽性菌，細胞壁不含內毒素的毒性成分，并具有促進動物消化道益生菌的生長，抑制有害菌的繁殖，改善腸道環境，增強動物免疫功能等多種作用，已作為益生菌飼料添加劑應用于畜禽生產中。而所表達的豬胰高血糖素樣肽-2可以刺激損傷腸道上皮的修復，達到預防腹瀉的目的。因此開發仔豬用表達腸黏膜胰高血糖素樣肽-2的重組益生菌，在飼料業與養豬業中具有廣闊的應用前景。目前國內在該領域的研究尚屬空白。?

發明內容

本發明的目的是針對目前仔豬斷奶應激導致的腸道損傷而不能有效修復，現有技術不足而無法解決的現狀，提供一種重組嗜酸乳桿菌的?構建方法及用途，研發一種能夠促進仔豬腸道粘膜損傷修復的重組嗜酸乳桿菌。本發明的重組嗜酸乳桿菌既具有嗜酸乳桿菌對腸道微生態環境的維護功能，又可以發揮重組胰高血糖素樣肽-2對豬腸道損傷的修復功能，達到治療仔豬因各種因素導致的腸道損傷繼而引起的腹瀉，增加仔豬的存活率，解決生豬養殖過程中的瓶頸問題。本發明的目的可通過下述技術方案來實現：?