[發(fā)明專利]一種Micro RNA表達檢測方法及其定量檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310036690.1
• 申請日: 2013-01-30
• 公開（公告）號: CN103205489A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姚遠颋;王海峰;費倩嵐;談竹君;勞昕元
• 申請（專利權(quán)）人: 上海黃離生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種Micro?RNA表達檢測方法及其定量檢測試劑盒。?

背景技術(shù)

Micro?RNA是近年來在多種真核細胞及病毒中發(fā)現(xiàn)的一類來源內(nèi)源性染色體上的非編碼單鏈RNA，長度為21～25nt的短序列，在進化上具有高度的保守性，能夠通過與靶mRNA特異性的堿基互補配對，引起靶mRNA降解或者抑制其翻譯，從而對基因進行轉(zhuǎn)錄后的表達調(diào)控（O`Donnell?KA,Wentzel?EA,Zeller?KI,et?al.e-Myc-regulated?microRNAs?modulate?E2F1?expression[J].Nature，2005,4(7043):839.）。由于Micro?RNA序列在不同的生物中具有一定的保守性，目前普遍認為Micro?RNA的功能是參與生命的一些基本過程，如發(fā)育過程中的細胞增殖、細胞死亡、應激反應和脂肪代謝等，越來越多的證據(jù)表明Micro?RNA在細胞中起著調(diào)控基因表達的重要作用。最近的研究發(fā)現(xiàn)Micro?RNA與細胞的癌變有著極為密切的關(guān)系，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Micro?RNA與肺癌、結(jié)直腸腫瘤、伯基特淋巴瘤和慢性淋巴細胞白血病等腫瘤疾病有關(guān)（Meltzer?PS.Cancer?genemics:Small?RNAs?with?big?impacts[J].Nature,2005,435(7043):745.）。?

由于Micro?RNA分子只有20-25nt左右大小，檢測較為困難。以前主要采用的方法是Northern?blot等雜交的方法進行檢測，方法繁瑣，不易成功，且Micro?RNA極易降解，對于結(jié)果影響也較大。?

為了克服之前檢測方法的缺陷，Allawi等建立了Invader?Assay的方法(Allawi?HT，Deahlberg?JE，OlsonS,et?al.Quantitation?of?Micro?RNAs?using?a?modified?Invader?assay.RNA,2004,10:1153-1161)，Liu等建立了寡核苷酸芯片方法(Liu?C，Calmn?GA，et?al.An?oligo?nucleotide?microchipfor??genome-wide?micro?RNA?profiling?in?human?and?mouse?tissues.PNAS，2004，101(26)：9740-9744)，這種方法提高了檢測的敏感性及實用性，但這種方法需要熒光標記和熒光儀或芯片檢測儀，而且由于micro?RNA分子太小，應用也受到一定的限制。?

如今，對Micro?RNA前體的檢測主要是采用RT-PCR的方法(Schmittgen?TD，Jiang?J，Liu?Q，et?al.A?high-throughput?method?to?monitor?the?expression?of?Micro?RNA?precursors.Nucleic?Acids?Research．2004，32(4)：e43)，采用隨機引物或與Micro?RNA前體互補的引物直接進行反轉(zhuǎn)錄，但是這僅僅只能針對特異的Micro?RNA，而且半定量的方法不能準確地表現(xiàn)出Micro?RNA的表達量，所以該方法已經(jīng)漸漸退出了Micro?RNA分子的檢測的行列。?