[發明專利]一種生物酸化浸米用乳酸菌的高密度培養方法

有效

• 申請號: 201310036013.X
• 申請日: 2013-01-30
• 公開（公告）號: CN103087962A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 曹鈺;程斐;謝廣發
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/25
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

技術領域

本發明涉及一種高密度培養方法，特別是一種生物酸化浸米用乳酸菌的高密度培養方法。

背景技術

小麥作為人類膳食的主要原料，所具有的營養特性主要集中于小麥的皮層，即麩皮中。小麥麩皮來源廣泛，價格低廉，含有較豐富的酶系、蛋白質、碳水化合物、維生素和礦物質等，這些物質可滿足乳酸菌發酵所需的營養物質以制備發酵劑。小麥麩皮如果能夠充分利用，將具有很高的經濟效益和社會效益。

乳酸菌指發酵糖類主要產物為乳酸的一類無芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。是人和動物正常微生物群，由于其特殊的生理功能被廣泛的應用于食品、醫藥以及飼料等行業。乳酸菌在生長過程中不斷的產生乳酸，導致培養液的pH值下降，當pH值下降到4.0以下時，菌體的生長繁殖會受到抑制，采用添加緩沖物質的方法，可以減緩pH值降低的速度，有利于乳酸菌的生長。

利用乳酸菌的生物酸化技術始于德國，最早應用在啤酒的麥汁制備階段。啤酒的生物酸化技術是指以從麥芽表面分離的非腐敗型啤酒乳酸桿菌或優秀乳酸生產菌為菌種，以啤酒廠未添加酒花的過濾后的頭道麥芽汁為培養基發酵生產乳酸，調節糖化過程中糖化醪和麥芽汁的pH值以滿足啤酒釀造需要，而無需額外添加酸。而且所生產啤酒的品質與傳統方法生產的啤酒無明顯差異。

使用乳酸菌進行生物酸化，乳酸菌在生長過程中產生大量的乳酸，降低環境中的pH值和氧化還原電位，形成不利于有害菌的生產環境，同時賦予食品特殊的風味。在黃酒釀造過程中，使用生物酸化浸米，能夠穩定浸米的質量和蒸飯質量，提高原料出酒率和能源利用效率，保障黃酒發酵的正常進行。

發明內容

本發明的要解決的技術問題是提供一種生物酸化浸米乳酸菌的高密度培養方法，使用麩皮為原料，原料來源廣泛，價格低廉，經酶解后營養豐富，適合乳酸菌的生長；添加檸檬酸銨起到補充無機氮源和緩沖調節pH的雙重作用；使用非高壓滅菌法，減少能耗和設備投入，整個操作流程簡單易于實現。

本發明的目的通過以下技術方案來實現：

（1）以麩皮為原料，麩皮添加量為60-90g/l

（2）500-900u/g麩皮的中性蛋白酶添加量，在40℃-50℃條件下酶解25-45min，升溫至60℃-68℃，40-80u/g麩皮的淀粉酶、500-900u/g麩皮的糖化酶添加量60℃-68℃條件下酶解25-45min，過濾取濾液得到麩皮酶解液（以后簡稱BEHM）

（3）BEHM中添加0.3%-0.6%的檸檬酸銨，70℃-80℃保溫25-45min滅酶、殺菌。

（4）以6%-12%的接種量接入乳酸菌，調節初始pH值5-7，培養溫度為30℃-37℃，培養12-16h。

本發明采用來源廣泛，價格低廉的麩皮為原料，采用低能耗的方法，適用于多種乳酸菌培養，獲得高密度的乳酸菌種子液，保證生物酸化浸米的實施。

具體實施方式：

實例1：

1.麩皮酶解液的制備

麩皮添加量為60g/l，添加600u/g麩皮的中性蛋白酶，40℃下酶解40min，升溫至60℃,添加45u/g麩皮的淀粉酶，500u/g麩皮的糖化酶，60℃下酶解40min，過濾取濾液得到麩皮酶解液。

2.檸檬酸銨的添加，滅酶、殺菌

麩皮酶解液中添加0.3%的檸檬酸銨，調節初始pH值5.0，然后升溫至70℃，保溫45min，滅酶、殺菌。

3.乳酸菌的培養

以6%的接種量接入乳酸菌（CGMCC1.568）種子液，30℃下培養16h。達到發酵終點。

4.乳酸菌的計數

采用稀釋分離涂布的方法，乳酸菌的菌濃可達到3.5*10⁹cfu/ml。

實例2：

1.麩皮酶解液制備

麩皮添加量為70g/l，添加700u/g麩皮的中性蛋白酶，45℃下酶解30min，升溫至64℃,添加55u/g麩皮的淀粉酶，600u/g麩皮的糖化酶，64℃下酶解30min，過濾取濾液得到麩皮酶解液。

2.檸檬酸銨的添加，滅酶、殺菌

麩皮酶解液中添加0.5%的檸檬酸銨，調節pH值6.0，然后升溫至75℃，保溫35min，滅酶、殺菌。

3.乳酸菌的培養

以8%的接種量接入乳酸菌（CGMCC1.568）種子液，32℃下培養14h。達到發酵終點。

4.乳酸菌的計數

采用稀釋分離涂布的方法，乳酸菌的菌濃可達到4.5*10⁹cfu/ml。