[發明專利]一種貽貝肉蛋白抗氧化肽及其制備方法

無效

• 申請號: 201310035469.4
• 申請日: 2013-01-29
• 公開（公告）號: CN103204906A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 王斌;馬佳卉;栗麗;羅紅宇
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16;C12P21/06
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛

技術領域

本發明涉及到蛋白抗氧化肽，具體指一種貽貝肉蛋白抗氧化肽及其制備方法。

背景技術

抗氧化劑是一類可以減弱或者祛除自由基對人體損害和保護食品免受氧化損傷變質的一類物質，主要分為天然和化學合成兩種類型。目前，以丁基羥基茴香醚（BHA）、二丁基羥基甲苯（BHT）和特丁基對苯二酚（TBHQ）為代表的化學合成抗氧化劑由于價格相對便宜、抗氧化活性好，從而被廣泛地應用到食品工業中。但是，現有研究表明化學合成抗氧化劑在不同程度上對人體的肝臟、腎臟等器官均有不利影響。因此，化學合成抗氧化劑的應用受到了較大影響，部分發達國家已限量或禁止使用對人體有毒副作用的化學合成抗氧化劑。因此，尋找高效、安全的天然抗氧化劑替代化學合成抗氧化劑成為研究熱點。

貽貝屬軟體動物門、瓣鰓綱、貽貝目、貽貝科，貽貝屬，是海產雙殼貝類，俗稱青口、海紅，素有“海中雞蛋”之稱，其蛋白質含有人體需要的纈氨酸、亮氨酸等8種必需氨基酸，且含量遠高于雞蛋、雞、鴨、魚、蝦和肉類。已有研究表明，貽貝提取物或貽貝肉酶解物具有抗腫瘤、降血脂、抗凝血、降血壓、抗氧化、提高免疫力等活性功能，專利號為ZL200510110096.8的中國發明專利公開了一種《厚殼貽貝的提取物、制造方法及其用途》，其是利用厚殼貽貝的提取物在抗流感和抗SARS病毒方面的應用；專利號為ZL200510024391.1的中國發明專利公開了《一種可提高免疫力功能的厚殼貽貝提取物》，其是關于厚殼貽貝的提取物在免疫調節方面的應用；申請號為201010296130.6的中國發明專利申請公開了一種《抗前列腺癌貽貝酶解提取物的制備方法及應用》，其是利用貽貝肉堿性蛋白酶（Alcalase）酶解提取物對前列腺癌細胞具有良好的增殖抑制作用。以上專利對貽貝的精深加工和活性開發具有重要意義。但是以上專利所提到的活性物質多為粗提取物或總酶解物，成分復雜，質量控制難度較大，從而在應用中受到多個方面的限制

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的現狀提供一種能夠清除自由基和抑制脂質過氧化作用的貽貝肉蛋白抗氧化肽，其可作為藥品、保健食品和食品的安全添加劑。

本發明所要解決的另一個技術問題是提供一種貽貝肉蛋白抗氧化肽的制備方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：該貽貝肉蛋白抗氧化肽，其特征在于該抗氧化肽為五肽化合物，氨基酸序列為YPPAK(Tyr-Pro-Pro-Ala-Lys)，ESI-MS檢測給出分子離子峰m/z[M+H]+575.26。

上述貽貝肉蛋白抗氧化肽的制備方法，其特征在于包括下述步驟：

1）將洗凈、去殼的貽貝肉用高速組織搗碎機處理成勻漿，然后按照料液比1g:2~4mL加入異丙醇，于30~35℃中脫脂20~24h，然后于2～6℃、4000~5000rpm離心10~15min除去異丙醇，收集脫脂貽貝肉固形物；

2）所述脫脂貽貝肉固形物按固液比1g:20~25mL加入濃度為0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液，調節pH為6.5~7.5，得到混合液；

3）將所述混合液溫度升至55~65℃攪拌預熱10~15min，以所述脫脂貽貝肉固形物的質量為基準加入2.0~4.0%的蛋白酶，在55~65℃酶解2~4h，得到酶解產物；

4）將步驟3）所得的酶解產物升溫至95~100℃后恒溫保持8~10min后，冷卻至20~25℃，然后離心，得到酶解液；

5）將上述酶解液加入0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液，使其濃度為20~25mg/mL，按照大孔樹脂重量與酶解液體積1g:40~50mL的比例將酶解液加入到大孔樹脂層析柱中，然后用純度為45～55%的乙醇進行洗脫，最后在溫度40℃以下，真空度-0.1MPa以下旋蒸除去乙醇，濃縮液進行冷凍干燥，得脫鹽酶解物干粉；

6）將上述脫鹽酶解物干粉溶于pH為6.8～7.2的0.04～0.06mol/L的磷酸鹽緩沖液中配成濃度為8～12mg/mL的溶液，于0.1~0.15MPa的工作壓力和20~25℃的工作溫度下采用超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于1kDa部分，得到超濾酶解液，超濾酶解液凍干后，得超濾酶解液凍干粉；