[發(fā)明專利]一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310034717.3
• 申請(qǐng)日: 2013-01-29
• 公開（公告）號(hào): CN103131690A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張凌怡;張招娣;高方圓;裴曉良;錢俊紅;張維冰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/14
• 分類號(hào): C12N11/14;C12N11/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

一、有機(jī)-無機(jī)復(fù)合基質(zhì)的制備

將修飾活性基團(tuán)的無機(jī)納米材料摻雜到有機(jī)整體材料中，20～80℃下反應(yīng)12～24h，在毛細(xì)管中制備有機(jī)-無機(jī)復(fù)合基質(zhì)；

二、對(duì)有機(jī)整體材料改性，鍵合活性基團(tuán)

將戊二醛溶液連續(xù)泵入步驟一得到的有機(jī)-無機(jī)復(fù)合基質(zhì)中反應(yīng)12～24h，對(duì)有機(jī)整體材料進(jìn)行改性，在其表面化學(xué)鍵合，得到含醛基化的有機(jī)-無機(jī)復(fù)合基質(zhì)；

三、蛋白酶的固定

在0～10℃的條件下將含有1～10mg/mL第一種蛋白酶的磷酸鹽緩沖液連續(xù)泵入到步驟二得到的有機(jī)-無機(jī)復(fù)合基質(zhì)中反應(yīng)12～24h，將此種蛋白酶結(jié)合到醛基化的有機(jī)-無機(jī)復(fù)合基質(zhì)表面；將含有0.1～1mol/L?Cu(II)的水溶液通入鍵合第一種蛋白酶的有機(jī)-無機(jī)復(fù)合基質(zhì)反應(yīng)2～10h，將Cu離子螯合到無機(jī)納米材料表面的活性基團(tuán)上，再進(jìn)一步通入1～10mg/mL第二種蛋白酶磷酸鹽緩沖液將第二種蛋白酶結(jié)合到無機(jī)納米材料表面的銅離子上；最后用pH為7.0～8.5的緩沖液洗去未固定的第一種蛋白酶和第二種蛋白酶，得到含有兩種酶解蛋白的有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱。

2.一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法，其特征在于，在所在步驟一中，所述的無機(jī)納米材料為納米二氧化硅、二氧化鈦、氧化鋅、石墨化碳中的一種；粒徑為10nm～500nm。

3.一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法，其特征在于，在所在步驟一中，所述的無機(jī)納米材料的形狀為球形、六方柱、棒狀；且無機(jī)納米材料表面修飾氨基或羧基活性基團(tuán)。

4.一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法，其特征在于，在所在步驟一中，所述的無機(jī)納米材料的質(zhì)量mg與有機(jī)整體材料的體積mL之比為2∶1～25∶1。

5.一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法，其特征在于，在所在步驟一中，所述的有機(jī)整體材料為聚丙烯酰胺整體材料、聚甲基丙烯酸酯整體材料或其它高分子整體材料。

6.一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法，其特征在于，在所在步驟二中，所述的有機(jī)整體材料的改性，通過質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5～10％的戊二醛引入醛基。

7.一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法，其特征在于，在所在步驟三中，所述的兩種蛋白酶是通過改性后有機(jī)整體材料表面的醛基的共價(jià)鍵合作用或氨基酸與銅離子的螯合作用得到固定。

8.一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法，其特征在于，在所在步驟三中，所述的第一種蛋白酶為trypsin、Glu-C、proteinase?K、chymotrypsin、elastase中的一種；

所述的第二種蛋白酶為trypsin、Glu-C、proteinase?K、chymotrypsin、elastase中的一種。

9.一種新型有機(jī)-無機(jī)復(fù)合納米整體酶解柱的制備方法，其特征在于，在所在步驟三中，所述的銅離子可通過CuSO4，CuCl₂，，CuNO₃溶液中任一種引入。